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3.2 空白样品吸光度△A0的测定
空白样品由2.5mL缓冲液、20uL酶、100uL显色剂、20uL底物组成。测定过程中需要注意以下几点：
首先，微量进样器不能混用，吸取酶的和吸取底物的应该是两个进样器，因为混用不仅会导致试剂污染，而且还会严重影响测定结果。
其次，试剂加入比色皿内的顺序应该固定，本次试验是先加入缓冲液，再加入酶，然后是显色剂，最后加入的是底物。这样做也可以减小实验误差。
第三，加入不同试剂后应该充分摇匀，摇匀的时候用干净的保鲜膜或者塑料袋盖住比色皿口，大拇指按住保鲜膜，食指托住比色皿底部，为了防止试剂直接接触手指而被污染。
第四，试剂使用之前先升温至室温，可用手紧握3分钟或者在37℃的水浴中加热，因为如果温度过低，会导致抑制率为零。
最后，一定要保证比色皿放入仪器进行测量的时间间隔基本相同，这样有利于减小实验误差。
下表就是在波长为412nm下平行测量10组的吸光度数据，见表3.2。
表3.2 空白样品吸光度△Ao的测定
次数 A1（3min前） A2(3min后) △Ao(3min变化值)
1 0.187 0.490 0.303
2 0.189 0.496 0.307
3 0.190 0.488 0.298
4 0.193 0.490 0.297
5 0.198 0.507 0.309
6 0.192 0.497 0.305
7 0.189 0.501 0.312
8 0.191 0.488 0.297
9 0.193 0.491 0.298
10 0.188 0.496 0.308
△Ao平均值 0.303
从上表3.2可知，空白样品的△Ao=0.303。根据每次测试前，都会把试剂包内的各种试剂升温至室温或者用水浴加热至37℃，所以，空白样品的吸光度变化值△Ao应该是相差甚微的。为了统一起见，在进行计算时就用△Ao=0.303。
3.3 敌敌畏吸光度的测定
3.3.1 不同浓度下的吸光度对比
配制了5种不同浓度的敌敌畏溶液，比较他们的吸光度值，从而通过计算得到不同浓度的乙酰胆碱酯酶抑制率。本次实验所配敌敌畏浓度分别为0.1mg/L、0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L、0.5mg/L，来做实验进行比较，数据如表3.3.1所示。
表3.3.1 不同浓度下的吸光度对比
浓度C
（mg/L） 吸光度A1
（0.5min时） 吸光度A2
(1.5min时) 吸光度A3
(2.5min时) 吸光度A4
(3.5min时)
0.1 0.198 0.298 0.322 0.329
0.2 0.258 0.331 0.352 0.354
0.3 0.312 0.371 0.382 0.385
0.4 0.368 0.412 0.423 0.425
0.5 0.412 0.451 0.459 0.461
图3.3.1 不同浓度下吸光度与反应时间变化图
3.3.2 不同浓度下的抑制率对比
根据3.3.1中的测定结果，可以得到不同浓度的敌敌畏溶液反应3min吸光度的变化值，
即△At =A4 -A1,计算数据如表3.3.2所示。
表3.3.2 不同浓度下的抑制率对比
浓度C
（mg/L） 吸光度A1