猪骨素 45 60
L-半胱氨酸盐酸盐 0.75 3
L-谷氨酸 0.75 2
葡萄糖 1.125 1
木糖 0.375 0.5
乙基麦芽酚 0.75 1
呋喃酮 0.75 1
水 25.5 31
2.2.2 白鼠的灌胃与称重
随机选取白鼠5只作为一组并关在一个笼子中,共分成5组,按照以后灌胃的剂量,香精不同,分别标示为对照组(CK),猪肉香精高剂量组(PH),猪肉香精低剂量组(PL),牛肉香精高剂量组(BH),牛肉香精低剂量组(BL)。同时每只白鼠都用三硝基甘油稀释液在其身体上作不同标记。每三天灌胃一次,灌胃香精的浓度也会逐渐加大,每十天称重,最后一天取血,解剖。
灌胃前4小鼠禁食不禁水,而一般时间段则自由摄取水和食物。每隔一天换一次垫料和鼠笼,早晚两次观察实验老鼠,适当添加水和饲料。
第一次灌胃高剂量为0.5 ml,低剂量为0.25 ml;第二次灌胃高剂量为0.6 ml,低剂量为0.3 ml;第三次灌胃高剂量为0.7 ml,低剂量为0.35 ml,其余几次灌胃都按照第三次的浓度来。一共九次灌胃,最后两次灌胃前香精都各稀释过一倍。
一段时间后,白鼠灌胃时较为狂躁,尤其是高剂量香精灌胃时,但无明显死亡,萎靡状态。
每次白鼠称重后的体重都要加以记录,直到某只白鼠死亡为止。实验期间,白鼠体重持续增加。
2.2.3 小鼠脏体比的测定
实验结束后,解剖小鼠分别取出心和肝,称重并记录数据。
2.2.4 小鼠血生化的测定
眼眶取血,所取血样做好标记,送往奉贤中心医院血液检测中心进行化验。检测项目有:谷草转氨酶,谷丙转氨酶,碱性磷酸酶,总蛋白,白蛋白,球蛋白,白球比,总胆汁酸,乳酸脱氢酶,肌酸激酶,甘油三酯,胆固醇,高密度脂蛋白,低密度脂蛋白,载脂蛋白A,载脂蛋白B,脂蛋白,载脂蛋白E,游离脂肪酸。
同时,把白鼠的血按照不同的组别稀释后,在260 nm,280 nm,340 nm,450 nm下作荧光分析。将猪肉组与对照组、牛肉组与对照组在不同波峰下作对比,检查波峰的不同对于美拉德反应末端产物对白鼠血液的影响。
2.2.5 小鼠心、肝组织的生化测定
心,肝组织研磨后,分别用氧化物歧化酶(SOD)WST-1法,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒法和丙二醛(MDA)试剂盒法测定。
(1) 氧化物歧化酶(SOD)WST-1法
准确称取组织重量,按照重量体积比1:9加入9倍体积生理盐水,剪碎组织,冰水浴制备匀浆,3000 r/min离心10分钟,取上清进行预实验。同时按照试剂盒上的药剂注入,分别测对照孔,对照空白孔,测定孔,测定空白孔,在450 nm下的数值。
(2) 谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)试剂盒法
类似SOD的方法制备10%组织匀浆后,用生理盐水稀释至1 %。
分别用生理盐水将1%的匀浆稀释成1.0 %、0.5 %、0.4 %、0.3 %、0.25 %、0.2 %、0.1 %、0.05 %一系列不同浓度的组织匀浆,分别取其0.2 ml按组织的测定操作表检测,使其浓度在合适范围内作显色反应。待获得合适的稀释范围后,再按试剂盒内操作表,作酶促反应,显色反应。其中显色反应要做空白管,标准管,非酶管和酶管,每种都要平行,在412 nm处测各管OD值。
(3) 丙二醛(MDA)试剂盒法测定
类似SOD的方法制备10 %的组织匀浆后,按照试剂盒内操作表,分别作标准管,标准空白管,测定管,测定空白管,且每种管都需做平行。
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