glgB/GASBD融合基因在马铃薯中的表达对淀粉分支程度的影响

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摘要：本研究是以马铃薯栽培品种Desiree的转基因株系为材料进行研究。首先对转基因马铃薯植株进行PCR检测，结果发现融合基因已经整合到马铃薯基因组中。然后通过RT-PCR分析和Western斑点杂交分析对转基因马铃薯植株进行检测，结果表明glgB/GASBD融合蛋白可以在淀粉生物合成中结合到淀粉颗粒中，并且glgB/GASBD融合蛋白具有很高的淀粉亲和性。最后用DNS法测定转基因马铃薯淀粉的分支程度，结果发现，glgB/GASBD融合基因在马铃薯块茎中的表达能使转基因淀粉的分支化程度增加35%。67933

毕业论文关键词：转基因马铃薯，glgB/GASBD融合基因，PCR，分支程度

Abstract: The transgenic plants of potato cultivars Desiree were used as the materials in this study. The results of PCR detection of the transgenic potato showed that the fusion gene had been integrated into the potato genome. Then the transgenic potato plants were analyzed by RT-PCR and Western dot blot, and the results show that glgB/GASBD fusion proteins can be integrated into the starch in the starch biosynthesis, and glgB/GASBD fusion protein had high affinity with starch. Finally, the starch branching degree of transgenic potato were analyzed by DNS method, and the results showed that the expression of glgB/GASBD fusion genes in the tubers of potato results in the starch branching degree had increased up to 35%.

Keywords: Transgenic potato， glgB/GASBD fusion gene，PCR，the degree of branching

前言 4

1 材料与方法 5

1.1材料 5

1.1.1植物材料 5

1.1.2 酶与试剂 5

1.2方法 5

1.2.1 转化植株的PCR检测 5

1.2.2 基因表达的半定量RT-PCR分析 6

1.2.3 马铃薯淀粉的提取 6

1.2.4 Western斑点杂交分析 6

1.2.5 转基因淀粉葡萄糖当量值(DE值)的测定 7

2 结果与分析 7

2.1 转化马铃薯植株的分析 7

2.1.1 PCR分析 7

2.1.2 半定量RT-PCR分析 9

2.1.3 Western斑点杂交分析 10

2.2 转基因对淀粉分支程度的影响 12

结论 14

参考文献 15

致谢 16

前言

淀粉的冻融稳定性是淀粉的一项重要功能性质[1]，主要是由直链淀粉/支链淀粉的比例和支链淀粉的分支化程度决定的，并且与高度分支化的且含有更多短链的支链淀粉相比，直链淀粉具有更高的老化倾向[2]，无直链淀粉比含有直链淀粉的淀粉具有更好的冻融稳定性。要改善马铃薯淀粉冻融稳定性的一种有效方法就是利用基因工程手段改变淀粉组分（直链淀粉和支链淀粉）的结构，从而有更高的淀粉分支程度。理论上，想获得具有更高冻融稳定性的淀粉，可以缩短直链淀粉长链和支链淀粉的分支链长度、增加支链淀粉的短分支链数量。比方说，运用反义抑制的方法同时下调3个淀粉合成酶基因（GBSSI，SSII和SSIII）在马铃薯中的表达，导致支链淀粉的分支链长度减少，最后获得了一个冻融稳定性显著改善的马铃薯淀粉[2]。Kortstee等(1996)报道在马铃薯突变体(amf)中异源表达大肠杆菌糖原分支酶(g1gB)基因，结果发现支链淀粉的分支化程度增加25%[3]。论文网