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摘要：通过比较两种培养基，两种诱导温度，不同的IPTG浓度和诱导时间对GASBD2蛋白在大肠杆菌BL21中的可溶性表达量的影响来确定GASBD2蛋白的最适诱导表达条件。结果表明；诱导培养基为TB培养基，诱导温度为25℃，诱导剂使用浓度为0.4 mM，诱导时间为12h时，GASBD2蛋白的可溶性表达量较高。54508
毕业论文关键词：GASBD2蛋白，可溶性表达，条件优化
Abstract： In order to the optimal induction conditions of soluble GASBD2 protein in E.coli B121(DE3), the effects of the two medium, the two induction temperature, different concentration and different time of IPTG induction on the soluble GASBD2 protein expression were investigated. The results show that the optimal induction conditions of the soluble GASBD2 protein expression is TB medium, 0.4mM IPTG at 25°C after 12h.
Keywords：GASBD2 protein, soluble expression, condition optimization
目 录
1.前言 4
2.实验材料 5
2.1 菌株 5
2.2 主要仪器 5
2.3 主要试剂 5
2.4 培养基 5
3. 实验方法 5
3.1 菌种活化 5
3.2 不同培养基对GASBD2蛋白可溶性表达的影响 5
3.3 不同诱导温度对GASBD2蛋白可溶性表达的影响 6
3.4 诱导剂浓度对GASBD2蛋白可溶性表达的影响 6
3.5 诱导时间对GASBD2蛋白可溶性表达的影响 6
3.6 SDS-PAGE凝胶电泳 6
4.结果与分析 8
4.1 不同培养基对GASBD2蛋白可溶性表达的影响 8
4.2 不同诱导温度对GASBD2蛋白可溶性表达的影响 8
4.3 诱导剂浓度对GASBD2蛋白可溶性表达的影响 9
4.4 诱导时间对GASBD2蛋白可溶性表达的影响 10
结 论 11
参考文献 12
致 谢 13
1.前言
大肠杆菌由于具有遗传背景清楚，容易培养，能大规模发酵，以及大量可供选择利用的克隆和高效表达载体［1,2］等特点，因此大肠杆菌表达系统是目前最常用的外源蛋白表达系统［3,2］。
然而，大肠杆菌表达系统也有局限性，当所表达的蛋白是复杂的真核来源的蛋白时，大肠杆菌常常不能将翻译出的多肽链正确折叠修饰形成蛋白质的天然构象，而是形成不溶性的无功能的包涵体［4］。国外有研究表明，利用基因工程表达的全长蛋白形成的包涵体，复性效率不高［5,6］，这在一定程度上影响着大肠杆菌表达系统的运用。所以，提高可溶性蛋白的表达量在生物工程中具有重要意义。
首先，培养基的组成对可溶蛋白的表达有影响。这不仅与营养成分的多少，还与pH值及葡萄糖效应等有关。营养成分影响菌体的生长，pH值影响酶的活性，间接影响可溶蛋白的表达。外源蛋白的表达显著地受葡萄糖浓度的影响，虽然葡萄糖比较适合作为菌体生长的碳源，但在诱导表达时期，需尽量保持低水平的葡萄糖，以甘油代替葡萄糖作为表达外源蛋白的碳源是解除葡萄糖效应的有效途径之一［7,8］。因此本实验中比较了主要成分为氯化钠、胰蛋白胨、酵母提取物的LB培养基和主要成分为胰蛋白胨、酵母提取物、甘油、磷酸二氢钾的TB培养基，确定优化条件。