菜单
　　

    第三章 克隆载体的构建

       从蝌蚪视顶盖获取目的基因—HDAC1，经RNA提取、逆转录成cDNA模板`751^文:论;文'网www.751com.cn，cDNA经PCR扩增回收后连接PTA2克隆载体，转化抽提后筛选重组子进行酶切、测序鉴定其准确性。

    3.1材料

    PTA2空载、KOD Plus 、TA克隆试剂盒（日本TOYOBO公司）；感受态菌株E.cori Top 10（-80°C保存）；RNA抽提、凝胶回收试剂盒（美国Axygen公司）；DM5000 DNA Marker、质粒小抽试剂盒（北京康为世纪生物科技有限公司）；逆转录酶（美国BIO-RAD公司）；限制性内切酶、T4连接试剂盒（美国Thermal公司）；Trptone、Yeast Extract、Nacl、Agar（上海生工生物技术有限公司）；3-氨基-苯甲酸乙酯（MS222）（意大利Sigma-Aldrich公司）

    主要仪器

       连续变倍体视显微镜：SMZ1500 Nikon(苏州欧米特光电科技有限公司)小型离心机（Eppendorf centrifuge 5424）；PCR仪（BIO-RAD C1000 Touch TM Thermal cycler）；凝胶成像系统（BIO-RAD GelDoc XR+Gel Imaging System）；细菌培养箱（美国Thermal公司）；超净工作台（上海博讯 SW-CJ-2FD）

    自配试剂：

    MS222：500mL Steinberg’s Solution和0.1g MS222 powder混匀，调节pH至7.4。

    3.2 方法

    蝌蚪用0.02％的MS-222进行麻醉后，收集视顶盖，提取总RNA（详细步骤参考Axrgen公司Axy Prep Mulitisoure Total RNA Miniprep Kit的说明书），电泳鉴定RNA质量后，将RNA逆转录成cDNA，对所获cDNA模板进行PCR扩增。

    引物序列（由Primer Primer 5.0软件设计，上海生工生物技术有限公司合成）：

    HDAC1 F：CGG AAT TCA TGG CGC TGA GTC AAG GAA C

  1. 上一篇：杭州西溪湿地原生动物群落结构研究
  2. 下一篇：小鼠脑瘤模型的构建

  1. 植物表达载体的构建及转...

  2. 细胞膜-细胞骨架连接蛋白...

  3. 低pH环境下小麦生长发育的蛋白表达变化研究

  4. GASBD基因在马铃薯中的表达...

  5. GASBD2基因在马铃薯中的表...

  6. glgB/GASBD融合基因在马铃薯...

  7. 在前导肽引入N-糖基化位点...

  8. 十二层带中心支撑钢结构...

  9. 大众媒体对公共政策制定的影响

  10. 杂拟谷盗体内共生菌沃尔...

  11. 乳业同业并购式全产业链...

  12. 电站锅炉暖风器设计任务书

  13. java+mysql车辆管理系统的设计+源代码

  14. 当代大学生慈善意识研究+文献综述

  15. 中考体育项目与体育教学合理结合的研究

  16. 河岸冲刷和泥沙淤积的监测国内外研究现状

  17. 酸性水汽提装置总汽提塔设计+CAD图纸

　　

About

751论文网手机版...

主页：http://www.751com.cn

关闭返回