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NH3·H2O-NH4Cl缓冲溶液的配制：准确称取5.3940g氯化铵，用蒸馏水溶解稀释，定容至1000mL,配制成0.10mol/L的NH4Cl溶液；量取氨水7.74mL,稀释至1000mL,配制成0.10mol/L的NH3·H2O溶液；按NH4Cl ：NH3·H2O体积比分别为8:1、4:1、2:1、1:1、1:2、1:4、1:8的比例配制，得到pH分别为8.60、8.90、9.10、9.50、9.80、10.10、10.40的缓冲溶液，备用。
表1 不同pH的NH3•H2O-NH4Cl缓冲溶液的配比
A 8 4 2 1 1 1 1
B 1 1 1 1 2 4 8
pH 8.60 8.90 9.10 9.50 9.80 10.10 10.40
所用试剂均为分析纯，水均为去离子水。
1.2 实验方法
在10mL比色管中依次加入2.00mL pH=9.50的NH3•H2O-NH4Cl 缓冲溶液、3.70mL浓度为1.0×10-4mol/L的酸性铬兰K溶液、一系列不同浓度的硒标准工作液，浓度为1.0×10- 3mol/L的H2O2溶液1.00mL、浓度为1.0×10- 5mol/L的牛血红蛋白溶液1.00mL，用水定容。在室温下放置30min后，在选定的吸收波长552nm下测定溶液的吸光强度为A3，以不加硒和牛血红蛋白的空白溶液为参比，同时测得空白溶液的吸收强度A1，不加硒的溶液测其溶液的吸光强度为A2，计算吸收强度差值即抑制率值I%= (A3-A2)/(A1-A2)，以抑制率值(I%)对硒的浓度(C)作标准曲线。
2 结果与讨论
2.1 紫外吸收光谱
按实验方法配制溶液，在吸收波长552nm下，牛血红蛋白模拟酶催化过氧化氢，氧化酸性铬兰K，吸光度降低。实验发现，硒的加入能够明显的增加体系的吸收强度。表明：硒对此牛血红蛋白催化体系有强烈的抑制作用，藉此建立了一种用分光光度法测定硒的新方法。