(2) 生理需要量(以GPx达到饱和为正常生理功能指标)40μg/日(全血硒约0.1μg/mL);
(3) 界限中毒剂量(指甲变形)800μg/日(全血硒1.0μg/mL);
(4) 膳食硒供给量50~250μg/日(全血硒0.1~0.4μg/mL,最佳生理状态);
(5) 膳食中硒的最高安全摄入量400μg/日(全血硒0.6μg/mL,建立硒储备、不发生任何毒副作用)。
若有硒中毒表现,仅需脱离高硒环境(减少膳食硒或停服补硒药品),即可自行痊愈。
有实验表明,人必须终身从饮食中获得足够的硒,才能有效地控制癌症及各种疾病的发生。
目前,测定硒的方法有分光光度法[2-4],原子发射光谱法[5],原子吸收法[6,7],电化学分析法[8,9],气相色谱法[10],原子荧光光谱法[11,12],循环中子活化分析法[13],ICP-MS方法[14-16]等。近年来,酶促反应动力学分析法在临床、医药、农业、工业过程检测中具有广泛的应用[17]。酶催化荧光法由于灵敏度高、检出限低、选择性好、操作简单、快速等优点,受到了人们的广泛关注[18,19]。酶催化荧光法可以测定盐酸肾上腺素[20],酚磺乙胺[21],盐酸氯丙嗪[22],盐酸多巴胺[23]等。在上述各种测定方法中,荧光光谱法准确度好,灵敏度高,所用仪器设备简单,是测定硒的常用方法,但所用的试剂毒性大,而且需要进口;中子活化法灵敏度高、且不损伤试样,但所需设备昂贵;电化学法近年发展较快,其灵敏度已达到或大于荧光法;原子吸收光谱法测定硒,虽然该方法灵敏度高,但基体干扰复杂;气相色谱法和原子吸收法灵敏度高,但精密度较差;经典分光光度法所需设备简单,但灵敏度较低;催化动力学光度法测定环境不易控制,准确度差,线性范围小;紫外分光光度法具有灵敏度高(可测到10-7g/mL),准确度好(相对误差为1%-5%,满足微量组分测定要求),选择性好(多种组分共存,无需分离直接测定某物质),操作简便、快速,仪器设备简单、便宜,应用广泛(无机、有机物均可测定)等诸多优点。
牛血红蛋白具有和天然生物酶751根过氧化物酶(HRP)相同的铁卟啉辅基和相似的空间结构,因而具备了过氧化物酶的特性,并且具有稳定、价廉的优点[24]。在碱性介质中,牛血红蛋白酶催化过氧化氢氧化酸性铬兰K,降低溶液吸光度。硒对该反应有强烈的抑制作用,建立了一种分光光度法测定硒的新方法。方法的检出限为4.57×10-4μg/mL。该法具有操作简单、灵敏度高、选择性好的特点。
1.实验部分
1.1 仪器与试剂
22PC11010分光光度计;BS210S 电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司) 。
牛血红蛋白(生化试剂;国药集团化学试剂有限公司)溶液的配制:准确称取0.6780g牛血红蛋白,用蒸馏水溶解稀释,定容至100mL,配制成1.00×10-4mol/L的储备液;工作液:量取5.00mL的储备液,稀释至100mL,配制成5.00×10-6mol/L的工作液,现配现用。
酸性铬兰K(生化试剂,北京化工厂)溶液的配制:准确称取0.0587g,用水稀释成2.00×10-3mol/L的储备液;工作液:用水稀释成2.00×10-4mol/L的工作液,现配现用。
过氧化氢溶液的配制:量取过氧化氢1.00mL,用蒸馏水稀释至100mL,得到0.10mol/L的储备液;工作液:取1.00mL的储备液,稀释至100mL,配置成1.00×10-3mol/L的工作液,现配现用。
硒(上海美兴化工股份有限公司)标准溶液的配制:准确称取0.0590g的纯硒粉于100mL烧杯中,加入5.00mL1:1的HNO3,加热溶解后,加1.00mL浓H2SO4蒸至冒白烟,冷却后用少量水溶解,转入250mL容量瓶,用水稀释至刻度。得到100μg/mL的硒标准储备液。移取5.00mL的储备液于100mL的容量瓶中,得到浓度为5μg/mL的硒标准工作液。
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