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2 实验部分
2.1 实验材料
2.1.1 实验材料和试剂
表2.1 实验材料和试剂一览表
原料名称 类别 生产厂家
肉桂精油 精油 上海应用技术学院
百里香精油 精油 上海应用技术学院
生姜精油 精油 上海应用技术学院
牛肉浸膏 培养基 国药集团化学试剂有限公司
蛋白胨 培养基 国药集团化学试剂有限公司
氯化钠 培养基 国药集团化学试剂有限公司
琼脂粉 培养基 国药集团化学试剂有限公司
氢氧化钠 培养基 国药集团化学试剂有限公司
大肠杆菌 菌种 上海应用技术学院
金黄色葡萄球菌 菌种 上海应用技术学院
荧光假单细胞菌 菌种 北京生物研究所
2.1.2 主要仪器和设备
表2.2 主要仪器和设备一览表
实验仪器 型号 生产公司
电子天平 AL204 瑞士梅特勒有限公司
质构仪 SMSTA.XTPlus质构仪 英国Stable Micro System公司
漩涡振荡仪 XH-C 新宝仪器有限公司
生化培养箱 SPX-250 上海申贤恒温设备厂
摇床培养箱 SI500 上海千一化工有限公司
高压灭菌锅 TW-AC50 上海沃迪自动化装备有限公司
2.2精油抑菌性能的研究
2.2.1 培养基的制备
将牛肉浸膏、蛋白胨和氯化钠按照一定配比加入到水中，将水煮至沸腾随后加入琼脂粉进行搅拌。待搅拌均匀后采用0.1%氢氧化钠调节体系的pH 至6.5。
2.2.2 菌悬液的制备
将菌种活化后接种到牛肉浸膏斜板上，置恒温培养箱中，在37℃下培养24h，至菌种生长情况良好。将无菌水加入试管中，用接菌环将活化后的菌种挑下，并使用振荡器将菌液摇匀，稀释至一定浓度的菌悬液。菌悬液浓度约为107-108 cfu/g。
确定菌悬液浓度流程图如图2.1所示：
图2.1 菌悬液浓度示意图
从菌种的斜面上刮取两环至已灭菌的100mL液体培养基中，用8层纱布包裹，放置于37℃、180转/min的摇床上培养16小时，制成原菌悬液。从原菌悬液中吸取1mL放入盛有9mL无菌水的小试管中，制成10-1的菌悬液，依次将10-1的菌悬液稀释为10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7、10-8的菌悬液。将已经灭菌冷却至45℃左右的固体培养基倒入培养皿中，摇匀、凝固后，将上述浓度的菌悬液吸取1mL分别加入固体培养基中，用涂布棒将菌悬液均匀涂布，每个浓度的菌悬液倒三个平板，置于37℃生化培养箱中培养24小时后，根据平板上的菌落数确定原菌悬液的浓度。平板计数结果如表2.3所示。
稀释度 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 10-6 10-7 10-8
菌落数 多不可计 多不可计 多不可计 多不可计 600个 120个 4个 1个
表2.3 菌悬液浓度确定表
根据国家标准,应选取菌落数在30-300个之间一定浓度下的菌悬液，由上表可得原菌悬液的浓度为120×106,即1.2×108。根据参考文献，适合做抗菌实验的菌悬液浓度为106-107，即需要将原菌悬液再稀释100倍即可。