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2.材料与方法
2.1材料与试剂
2.1.1材料
大豆铁蛋白SSF：自制，取材大豆（当地市场所采购）；大豆分离蛋白SPI：市场购买。
2.1.2试剂
材料 材材质与规格 来 源
植物油 食用级 上海嘉里食品工业有限公司
KH2PO4 分析纯 江苏常州川磷化工有限公司
NaH2PO4 分析纯 江苏常州川磷化工有限公司
Na2HPO4 分析纯 江苏常州川磷化工有限公司
Tris 分析纯 北京拜尔迪生物科技有限公司
SDS 分析纯 北京拜尔迪生物科技有限公司
MgCl2 分析纯 江苏无锡生化有限公司
Na3C6H5O7 分析纯 江苏无锡生化有限公司
HCl 分析纯 江苏无锡生化有限公司
NaOH 分析纯 江苏无锡生化有限公司
甘油 分析纯 江苏无锡生化有限公司
乙醇 分析纯 江苏无锡生化有限公司
2.2仪器与设备
仪器名称 型号 制造商
均质机 PN003879 北京亚兴泰机电设备有限公司
紫外可见分光光度计 UV-160，Shimadzu Shimadzu Japan公司
pH计 台式 深圳泰瑞特科技有限公司
冷冻干燥机 台式 上海浦东冷冻干燥设备有限公司
微量移液器 各种型号 德国 Eppendorf 公司
匀浆机 T10 basic 德国 ART 公司
高速冷冻离心机 Eppendorf 5810 Germany
Native和SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳仪 laborota Germany
DAD UV检测仪 NFT 河北润联科技有限公司
2.3试验与方法
2.3.1大豆铁蛋白的提取
大豆铁蛋白分离纯化参考已经报道的方法（Laulthere etal.,胡菊等，2009）[8]，具体步骤如下：
将1kg干大豆种子去除杂质后置于4℃蒸馏水中浸泡过夜（约12 h），捞出浸泡后的大豆，加入3倍体积含有1%PVP的50 mM KH2PO4-Na2HPO4（pH 7.5）并用内切式匀浆机均浆2 min，用榨汁机去除残渣榨出汁液。静置一段时间消除泡沫后，收集滤液在55℃下水浴加热15 min，静置冷却后，用离心机12000 g离心10 min，取上清液。向上清液中加入终浓度为500mM MgCl2 晶体搅拌加速溶解后静置30 min，再加入终浓度为700 mM柠檬酸三钠晶体搅拌加速溶解并静置8h。然后，12000 g离心30 min，收集褐色沉淀。再加入3倍体积上清液冲洗沉淀中的淀粉和核糖体，并12000 g离心5 min，弃上清，反复冲洗三次，然后将沉淀溶于3倍体积提取缓冲液冲，12000 g离心5min，重复操作至沉淀完全溶液，收集并合并上清（此为大豆铁蛋白粗品）。