产胞外多糖细菌菌株的筛选鉴定(4)

菜单

色谱分离时，大分子的多糖会比小分子的先洗下来。对分子量较大的多糖，所选择的sephadex G类所对应的凝胶型号一般都为sephadex G‐100，sephadex G‐150和sephadex G‐200，这些都是属于比较软的一些凝胶。但sephadex G‐200由于太软已停止生产，可以考虑一下用Cellufine GCL‐2000来代替，此种填料的基材是纤维素，机械强度较好，并且它的分子量的范围较宽，较适合于多糖的分离[11]。

（二）离子交换层析法

阴离子交换柱层析是目前在多糖的纯化过程中应用最普遍的方法之一,特别是对体积较大的多糖溶液,多数首先考虑采用阴离子交换柱层析来纯化。通过柱层析之后,多糖溶液得到浓缩和初步纯化(有的多糖原料通过该步骤就可以得到各种均一的多糖组分)。迄今为止应用的阴离子交换剂包括DEAE‐葡聚糖(DEAE‐Sephadex)、DEAE‐纤维素 (DEAE‐cellulose)和DEAE‐琼脂糖(DEAE‐Sephadex)这3种,其中尤以 DEAE‐纤维素应用最为广泛。DEAE‐cellulose拥有开放性的骨架,多糖能够自由进入载体中并迅速扩散[11,12,13]。文献综述

c.季铵盐沉淀法

季铵类的氢氧化物是一种乳化剂，可以与酸性糖形成不溶性的沉淀，常用来分离酸性的多糖。季铵类氢氧化物与中性的多糖不生成沉淀，但是当调高PH，使某些羟基解离，或者加硼酸缓冲溶液增高糖的酸度时，中性的糖也能狗被沉淀。利用季铵类氢氧化物在中性、酸性、微碱性和碱性中分级沉淀可分离多糖[13]。

d.甲醇分级沉淀法

经常用到的分级沉淀法是指在混合多糖的浓的水溶液中（常在PH为7时），逐步地加入乙醇，以收集不同的醇浓度下析出来的沉淀。一般各级沉淀需在反复溶解后，再进行醇析，直到所测得的物理常数达到恒定，最常用的是电泳检查和旋光度测定。使用分级沉淀法所得到的多糖，常混杂有较多的蛋白质，必须去除。一般会选择那些能使蛋白质沉淀而不使多糖沉淀的试剂来进行处理，如三氯乙酸、酚和鞣酸等试剂。但是处理时间必须短，温度要低，以避免多糖降解[14,15]。