产胞外多糖细菌菌株的筛选鉴定(3)

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（1）酶促水解源:自~751·论`文'网·www.751com.cn/

常见的处理对象、酶的种类、意义总结如下表[9]。

表1-1 酶促水解项目表

待处理

的对象所用的酶得到的产物应用条件应用的意义

淀粉

淀粉酶(来自大麦芽、微生物) 种类繁多生产糖浆、改善食品感官性质

纤维素

纤维素酶(包括内切酶、外切酶以及葡糖苷酶)

短纤维素链、纤维二糖和葡萄糖 30-60℃

PH4.5-6.5 生产葡聚浆、膳食纤维

及提高果汁的榨汁率和澄清度等

半纤维素半纤维素酶(L-甘露聚糖酶、L-阿拉伯聚糖酶、L-木聚糖酶

L-半乳糖聚酶) 木糖、半乳糖、甘露糖、

阿拉伯糖以及其它单糖提高食品的质量

果胶果胶酶(有内源的和商品之分）

主要为半乳糖醛酸，另外有少量的半乳糖、阿拉伯糖等使植物质地软化以及水果榨汁的澄清

（2）酸碱催化水解[10,11]

1) 酸催化

a机理：b影响因素：

　　多糖的类型：对中性多糖会起作用，对其它糖不一定起作用

　　温度：温度提高，酸催化的速度会大大地提高

　　糖苷键类型：α –糖苷键比β –糖苷键水解更容易；

　　1,6-> 1,4-> 1,3-> 1,2-

单糖的环的大小：呋喃环相比吡喃环更容易水解

　　多糖结晶的程度：结晶区更难水解

2)碱催化--转消性水解

1.2.4多糖的分离方法

尽管多糖物质的来源不同、种类繁多，但其分离和纯化的方法基本上类似，主要是利用多糖可以溶于水、酸、碱或盐溶液，而不溶于醚、醇和丙酮等有机溶剂的性质。在提取时，一般应该先将植物原料进行脱脂和脱色素，然后再以水为主体溶剂（如冷水、热水或低浓度的酸、碱溶液）来提取多糖。提取液用醇、丙酮等试剂沉淀析出，所得的粗多糖需经过反复的溶解和醇析。对于含糖较多的苷类物质也可采用此方法得到总苷。糖类在提取之后要进一步除去大量的非糖类杂质，然后再进行混合糖类物质的相互分离，这是一项较困难的工作，尤其是多糖类物质难以获得纯品。

一般可以采用下列方法来分离纯化混合多糖，其中的柱层析法是现在采用较多的方法。论文网

a. 透析、超滤和超速离心

选用不一样的规格的超滤膜、透析带来进行超滤和透析, 及一定条件的超速离心操作,可以按分子大小的差异把多糖样品进行分级。超滤和透析的方法更常用于去除小分子杂质。

b. 柱层析法

（一）凝胶过滤层析法

这种方法是根据多糖分子的大小和形状的不同而达到分离目的，已应用于各种植物的淀粉中直链及支链多糖的分离。常用到的凝胶色谱分离材料主要包括：琼脂糖凝胶（sepharose）,葡聚糖凝胶（sephadex LH‐20、sephadex G）, 聚丙烯酰胺凝胶（Bio‐gel P），纤维素凝胶（cellufine GCL‐2000）等。