P53在中国石龙子生精细胞凋亡过程中的作用

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摘要中国石龙子（Eumeces chinensis）属于爬行纲(Reptilia)、有鳞目(Squamata)、石龙子科(Scincidae)、石龙子属(Eumeces)，主要分布在我国南部和越南。由于中国石龙子具有对环境温度和环境中人为干扰因素高度敏感的生理学特点，是研究生精细胞凋亡的理想模型。本文使用TUNEL技术证明了对中国石龙子施加环境压力可诱导其生精细胞的凋亡；使用Realtime-PCR技术检测了P53基因在不同组织中的表达情况，并在环境压力（热应激、冷应激、束缚应激、Cd暴露）诱导的凋亡下，从基因水平上初步探究了P53在中国石龙子生精细胞凋亡中的作用，为进一步全面、深入研究爬行类精子发生过程中的凋亡机制提供了依据。43913

毕业论文关键词：凋亡；环境压力；生精细胞； P53

Abstract:Eumeces chinensis belongs to to Reptilia, Squamata, Lacertilia, Scincidae and mainly distributes in the south of China and Vietnam. The Eumeces chinensis is a good material for spermatogenic cells apoptosis experiment because of its hight sensitivity for environmental temperature and Human disturbance factors. We have confirmed the Eumeces chinensis spermatogenic cells would occur apoptosis induced by environmental stresses; analyzed the gene expression characteristics of P53 in different tissues by real-time quantitative PCR and analyzed the function of P53 in Eumeces chinensis spermatogenic cells which undergoing apoptosis induced by environmental stress in gene level. All of these can provide basis for the further comprehensive and in-depth study in reptiles apoptosis mechanism.

Keyword: apoptosis； environmental stress； spermatogenic cells； P53

摘要 2

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1.引言 4

2.实验材料和仪器 5

2.1 实验动物 5

2.2 实验相关试剂以及试剂盒 .7 3. 实验方法....7

3.1ec-P53在不同组织中的表达检测（Realtime PCR） 7

3.2应激处理.11

3.3各组精巢的凋亡检测（TUNEL凋亡检测） 11

3.4应激处理后各组精巢中ec-P53的表达检测 12

3.5数据分析...12

4.实验结果13

4.1ec-P53 基因组织特异性表达13

4.2不同应激组精巢凋亡情况检测...14

4.3 不同压力处理后P53 mRNA在精巢中的表达模式..15

5.讨论...16

5.1 ec-P53在不同组织中的表达特点...16

5.2环境压力对中国石龙子精巢的影响 16

6.小结...17

7.展望....18

参考文献.18

致谢....21

1.引言

精子发生是一个复杂的生理过程，最终所形成的精子是否具有受精能力，对物种的繁衍具有十分重要的意义（Salinas et al.,2006；Campion et al.,2010; Shaha et al.,2010）。无论是高等动物还是低等动物，精子发生过程中异常生精细胞的及时清除是形成高质量精子的重要保障，同时也是物种与环境高度适应的繁殖对策。事实上，精子发生过程中多数生精细胞会通过细胞凋亡被清除，从而保证精子质量。