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摘要：目的：通过测定蚂蟥冬眠不同时期细胞凋亡与自噬相关基因的表达，从基因组学的角度来研究冬眠蚂蟥细胞凋亡与自噬相关基因表达的变化 方法：通过荧光定量PCR技术检测蚂蟥冬眠不同时间AIF1、caspase-3、caspase-8、ATG3、ATG7、bcl-2、Beclin-1的表达的变化 结果：研究发现，在整个冬眠处理过程中，细胞凋亡相关的基因AIF1、caspase-3、caspase-8、bcl-2等整体表现为先降低后升高的变化趋势，在深冬眠时期的表达量达到最低值；细胞自噬相关的基因ATG3、ATG7、beclin1等整体表现为先升高后降低的变化趋势，在深冬眠时期表达量达到最高值。变化趋势明显，差别显著。结论：冬眠期间，蚂蟥细胞凋亡的水平降低，细胞自噬的水平升高。25769
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毕业论文关键词：蚂蟥；冬眠；细胞自噬；细胞凋亡；基因表达
Study on Autophagy and Apoptosis regulation of Whitmania pigra in different time of Hibernation
Abstract：Objective: through the determination of expression in different periods of hibernation whitmania pigra apoptosis and autophagy related genes, changes from genomics perspective to study the expression of apoptosis and cell hibernation whitmania pigra autophagy related gene expression detection: through changes of the whitmania pigra hibernate fluorescence quantitative PCR technology, caspase-3 and caspase-8 in different time of AIF1, ATG3, ATG7, bcl-2, Beclin-1 the study found that: in the whole process of hibernation, apoptosis related gene AIF1, Caspase-3, Caspase-8, bcl-2 etc. overall showed a trend of decreased first and then increased, reaching the lowest value in the expression of deep hibernation period; autophagy related gene ATG3, ATG7 and Beclin1 for the overall performance trend increased and then decreased, reached the maximum expression in deep hibernation period. The trend of change is obvious, and the difference is remarkable. Conclusion: during hibernation, whitmania pigra apoptosis decreased, increased autophagy level.
Key words：whitmania pigra；hibernation；autophagy；apoptosis；gene expression
目 录
摘要 3
Abstract 3
引言 3
1 材料与方法 4
1.1 材料 4
1.1.1实验动物 4
1.1.2实验仪器 4
1.1.3实验试剂 4
1.2方法 4
1.2.1实验设计 4
1.2.2引物设计 4
1.2.3蚂蟥消化道总RNA的提取 5
1.2.4 RNA的鉴定 5
1.2.5去除基因组DNA和cDNA的合成 5
1.2.6 Real-time PCR测定AIF1，ATG3、ATG7、caspase-3、caspase-8、bcl-2和Beclin-1表达量 5
1.2.7统计分析 6
2 结果与分析 6
2.1 蚂蟥冬眠不同时期AIF1表达的变化 6
2.2 蚂蟥冬眠不同时期caspase-3，caspase-8表达的变化 6
2.3 蚂蟥冬眠不同时期bcl-2表达的变化 7
2.4 蚂蟥冬眠不同时期ATG3，ATG7表达的变化 7
2.5 蚂蟥冬眠不同时期Beclin1表达的变化 8
3 讨论 8
3.1 冬眠处理对蚂蟥细胞凋亡基因表达的影响 8
3.2 冬眠处理对蚂蟥细胞自噬基因表达的影响 9
3.3 冬眠处理过程中蚂蟥细胞自噬和凋亡的相互作用 10
蚂蟥冬眠期间细胞凋亡与自噬相关基因表达的研究
蚂蟥Whitmania pigra Whitman，又称宽体金线蛭，是2015版《中国药典》中收录的中药材水蛭的基原动物之一[1]。具有破血消症、逐瘀通经之功效，具有显著的抗血小板凝集、降低血液粘稠度、预防血栓形成的作用，用于血癖经闭，中风偏瘫，撤瘤痞块，跌扑损伤。蚂蟥也是典型的冬眠动物，当环境温度降低到一定程度的时候，蚂蟥会出现停止进食，减少活动甚至冬眠来度过寒冷的冬季。随着医药市场对中药材水蛭的需求急剧增加，以及环境污染等问题的日益加重，导致了蚂蟥野生的资源几近枯竭。近年来，对于蚂蟥的研究取得了长足的进展，南京农业大学中药材研究所蚂蟥实验室对于蚂蟥的呼吸、摄食规律、消化生理以及生理生化等方面的研究取得了骄人的成果[2][3][4][5][6][7]。然而，目前关于蚂蟥冬眠期间细胞凋亡和细胞自噬的研究还未见报道，本实验拟通过研究蚂蟥冬眠期间细胞凋亡和细胞自噬相关基因的表达的变化，为进一步研究蚂蟥冬眠期间的细胞凋亡和自噬的调控机制提供理论基础和科学依据。