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摘要Penicillium expansum是主要的采后病原真菌，对果蔬的贮藏具有极大的危害。因此，寻找有效的防治方法具有重要的意义。本文对腐烂梨果实中主要的病原菌进行了分离及rDNA-ITS法鉴定，确定为P. expansum；通过RP-HPLC法测定了NaHCO3对Patulin毒素生成量的影响；通过qRT-PCR法分析了NaHCO3对4种Patulin合成相关基因相对表达量的影响。实验结果将为提高NaHCO3在采后果蔬病害控制方面的应用潜力提供理论基础。43906
Penicillium expansum is the main postharvest pathogenic fungi, with great harm to fruit and vegetable storage.Therefore,searching for effective prevention methods has important significance. In this paper, the main pathogens from rot pear fruit were isolated and identified with rDNA-ITS France, and identified as P.expansum; the amount of Patulin toxins generating that NaHCO3 impact on were determined by RP-HPLC;the four kinds of Patulin biosynthesis gene relative expression levels that NaHCO3 impact on were determined by qRT-PCR analysis.The results will provide a theoretical basis on improving NaHCO3 potential in areas of post-harvest fruits and vegetables disease control .
毕业论文关键词： 扩展青霉，碳酸氢钠，致病性，棒曲霉素，抑菌活性
Keyword: Penicillium expansum, Sodium bicarbonate, Pathogenicity, Patulin, Antifungal activity
目 录
摘要··2
1 研究背景·4
2 材料与方法·5
2.1菌株及主要试剂·5
2.2病原菌的分离及rDNA-ITS法鉴定·5
2.3 RP-HPLC法测定P. expansum侵染的梨果实中Patulin含量5
2.4总RNA分离和定量RT-PCR6
2.5数据统计与分析·6
3 结果·6
3.1形态学观察结合遗传背景分析确定分离的病原菌为P. expansum6
3.2 NaHCO3抑制P. expansum代谢毒素patulin的产生··8
3.3 NaHCO3影响patulin合成过程中相关基因的表达·9
4 讨论··10
参考文献·11
致谢·14
1 研究背景
P. expansum是梨果类采后的主要病害，它引起果实腐烂和毒素积累，降低果实的保存时间和商品价值，为水果产业带来极大的损害。目前，提高储藏环境的卫生条件可以有效的降低果实的腐烂率、腐烂程度以及毒素的积累。杀菌剂的喷施、生防菌的使用、以及气调处理均可提高低温的效用。但是过量使用杀菌剂将导致抗性菌株的产生，以及化学物质的残留。同时，一些杀菌剂还会导致青霉次级代谢的提高，引起毒素积累提高[1]。气调对于水果的长期贮藏是比较适宜的方法论文网，但无法代替杀菌剂的作用。BCA的生防效果较好，但是成本昂贵，同时受环境条件影响较大（温度、空气成分、湿度、营养成分等）。因此，发展更为有效的、与环境友好的贮藏方法及策略是必须且必要的。
近二十年，一些低毒或无毒的新型抗真菌剂（如碳酸氢钠、亚磷酸盐、精油、硼酸等）用于采后病害防治方面的研究取得了较大进展[2-5]。有研究报道显示，碳酸氢钠（NaHCO3）在多种水果的不同种采后病害防制中起到重要作用[6-9]。碳酸氢钠作为一种广泛用于发酵，pH调节，调节口感和质构的食品添加剂，它被美国食品和药物管理局列为公认安全（GRAS）的化合物，同时由美国环境保护署免除其对所有农产品的残留限量。NaHCO3是一种非常有潜力的杀菌剂替代品，因为它容易获得，便宜而且可以易于控制、操作。
单独使用或结合其他方法（如微生物生物防治剂）使用时，NaHCO3均能减少采后病害的发生率。有研究表明，3%（w/v）NaHCO3能有效降低柑橘上penicillium digitatum导致的绿霉病的发病率，其降低率能达到100%[10]。采后果实经过300mM NaHCO3溶液浸泡10分钟后*751`文~论|文/网www.751com.cn，香蕉炭疽病的病斑直径显著减小，香蕉冠腐病、花败腐烂病的发病率也显著降低[7]。NaHCO3与Rhodosporidium paludigenum，Bacillus amyloliquefaciens HF-01，Metschnikowia pulcherrima, Cryptococcus laurentii或Trichoderma harzianum DGA01结合使用时，其抑制采后病害的效果也很好[11-13]。NaHCO3还可以增强咯菌腈和噻苯咪唑对采后柑橘类水果绿霉病的防治功效[14]。此外，研究人员发现NaHCO3可以诱导橘子伤口处结晶蜡形成，激活果实抵抗力以及增加抑霉唑的水平[8]&[11]。