1.3.3 皂甙的提取和纯化技术
大多数皂甙极性较大,多具有吸湿性,易溶于水、热甲醇和乙醇,难溶于丙酮和乙醚,皂甙在含水丁醇中有较大的溶解度,所以,丁醇常作为提取皂甙的溶剂。皂甙元则不溶于水而溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿等低极性溶剂中。皂甙有助溶性,可促进其它成分在水中的溶解。甾体皂甙和三萜皂甙的提取分离方法基本相似。经典的而且目前仍然通行的提取方法是用甲醇、乙醇或水回流、温浸或渗漉提取,把减压浓缩提取液得到的浸膏悬浮于水,依次用石油醚或正已烷、氯仿或乙酸乙脂、水饱和的正丁醇等不同极性的溶嗣萃取,或者将浸膏上硅胶柱,用上述溶剂洗脱。皂甙大多数集中在正丁醇相,在石油醚和正已烷等中可能有皂甙元,将正丁醇提取液减压浓缩即得粗总皂甙。也可以直接用水提取,将减压浓缩提取液得到浸膏依前法处理得到粗总皂甙。由于皂贰不溶于乙醚和丙酮,因此有人将用上述方法得到的浸膏溶于适量甲醇,然后加足量乙醚或丙酮或乙醚/丙酮(1:1)沉淀,滤取沉淀为粗总皂甙。近年来采用大孔树脂或大孔网络树脂柱层析法得到的粗总皂甙,先用水洗去糖、氨基酸等强极性组分,然后甲醇、乙醇或它们的水溶液洗脱得总皂甙。[32]
1.3.4 皂甙HPLC定量分析方法
关于薯蓣皂甙元含量测定的方法较多,已报道有重量法、红外分光光度法、微量电位滴定法、薄层光密度法、气相色谱法、比色法、高效液相色谱法、可见光光度法。除高效液相色谱法外,其他方法都须薯蓣皂甙元分离、精制后再测定,因此有较大的误差。高效液相色谱法同其他测定方法比较,对提取的薯蓣皂甙元可直接测定,且快速准确、重现性好。
1.4 研究的目的和意义
国内外关于总皂甙元的研究报道,多数都集中在人参、三七、西洋参等并对其定量定性分析、结构和生理活性的研究上。而关于紫山药皂甙提取和纯化系统的研究未见报道。国内有关紫山药皂甙这方面的研究还尚少,可开发新的研究领域,应用现代科技手段,改进工艺流程,提高紫山药总皂甙得率,具有实际的生产意义,可适用于工业化生产。从经济与市场方面看,由于皂甙有着广泛的应用价值,且价格昂贵,每吨在10万美元左右。皂甙虽然广泛分布于许多植物中,但含量较高的植物并不多见,近些年来皂甙多从人参、薯蓣、绞股蓝等中药材植物中提取,成本较高。用紫山药提取皂甙,一是考虑到紫山药资源丰富、成本低;二是可以借鉴已研究植物皂甙的新方法、新工艺,来探索规模化生产的提取纯化技术的参数和工艺,为紫山药的深加工和产业化奠定基础。
国际上许多国家对紫山药的研究已经比较深入、全面,包括紫山药的种植、加工、生物活性成分研究、药理药效研究直至最终产品开发。我国虽然是紫山药的重要生产国之一,但与之不相称的是,目前我国对紫山药深加工的研究却显得非常薄弱,这就严重阻碍了紫山药资源的综合开发利用。国内在有关紫山药栽培和育种等传统研究领域所做的工作较多,对紫山药精深加工特别是紫山药功能因子的研究开展比较少,综合利用方面更鲜有报道。因此,以我国资源丰富而又急待开发的紫山药为研究对象,以其中的活性物质皂甙为主要研究对象,对其提取纯化工艺开展系统的研究,为开发利用紫山药资源、生产皂甙制品提供可靠的科学依据,无论是在理论研究还是生产实践上都具有重要意义。
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