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若有浑浊现象可以离心之以消除。根据标准曲线计算出黄酮的含量。
2.2.5 VC含量的测定
称取1g左右种芽,加等量2%草酸溶液,迅速用研钵充分研磨成匀浆。用1%草酸将样品移入50mL容量瓶中,定容至刻度,摇匀。然后将样液过滤,其过程中应在漏斗上盖上一张滤纸,尽量减少VC被空气氧化,弃去最初的10mL滤液。用标定的2,6-二氯靛酚染料将滴定管润洗2-3次,放空润洗液,注入2,6-二氯靛酚溶液,调节液面至零刻度。准确量取滤液10mL于锥形瓶中,立即用2,6-二氯靛酚溶液滴定,滴定过程中边振荡边观察,直至溶液出现粉红色时减慢滴定速度,控制滴定量,直至粉红色15s内不褪色为止,即为滴定终点。记录所用滴定体积[30]。
计算:
每百克样品中抗坏血酸毫克数 = ×100 (2.4)
式中:V —— 滴定时所耗去染料溶液的量(mL);
T —— 1mL染料溶液相当于抗坏血酸标准溶液的量(mL/mg);
W —— 滴定时所取的滤液中含样品量(g)。
2.2.6 过氧化氢酶(CAT)比活力的测定
用研钵把发芽的样品磨成匀浆,称取一定量种芽,加入2-3mL 4℃预冷的PH7.8磷酸缓冲液,转入25mL容量瓶,定容至刻度,混匀。 4℃冰箱,静置10min,上清液4000npm离心15min。
取样液0.2mL,PH7.8磷酸缓冲液1.5mL,蒸馏水1mL于试管中。25℃预热后,加入0.3mL0.1moL/L H2O2 ,迅速倒入石英比色皿中,磷酸缓冲液做参比,240nm下测吸光度,每隔1min读数一次,共测4次,按下式计算酶活性。
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