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    2.2 实验方法
    2.2.1 样品的制备
    挑选颗粒饱满,无病害和残缺的一定量杂粮种子(红小豆、绿豆、花生仁、糜子),清水冲洗2-3遍。洗净豆芽机,把杂粮种子均匀播洒于豆芽机的白色托盘上,灌好适量的水,温度设定为“高温模式”, 开始发芽,两天换一次水,分别在第3天(70h)、第6天(140h)和第12天(288h)培养萌发后,定时随机抓取一定数量的杂粮种子,进行各项实验数据的测定。
    2.2.2 含水量的测定
    以直接干燥法测定水分含量。测定方法:取玻璃制的扁形称量瓶,置于101 ℃-105 ℃干燥箱中,瓶盖斜支于瓶边,干燥1.0 h,置冷却器内冷却0.5 h,取出盖好,称量,并重复干燥至前后两次质量差不超过2 mg,即为恒重。将已经切碎的种芽样品,放入称量瓶中,加盖,精密称量后,置101 ℃-105 ℃干燥箱中,瓶盖斜支于瓶边,干燥2 h-4 h后,放入冷却器内冷却0.5 h,取出盖好,称量。然后再放入101 ℃-105 ℃干燥箱中干燥1 h左右,取出,放入冷却器内冷却0.5 h后再称量。并重复以上操作至前后两次质量差不超过2 mg,即为恒重。
    试样中的水分含量按式进行计算:X =  ×100%          (2.1)
    式中:X —— 试样中水分的含量,单位为克每百克(%);
    m1 —— 称量瓶和试样的质量,单位为克(g);
    m2 —— 称量瓶和试样干燥后的质量,单位为克(g);
    m3 —— 称量瓶的质量,单位为克(g)。
    2.2.3 发芽率及发芽势的测定
    固定温度设定为“高温模式”,浸泡时间为0小时,分别在杂粮种子第3天(70h)、第6天(140h)和第12天(288h)培养萌发后,定时随机抓取一定数量的种子,统计其发芽率。拉直芽根,用尺测其长度,记录数据,计算平均芽根长,最后根据发芽天数,计算发芽势。
        发芽率 =  ×100%                                (2.2)
     发芽势(cm/h) =  ×100%                         (2.3)
    2.2.4 黄酮含量的测定
    以紫外线分光光度法测定黄酮含量[29]。
    (1) 做标准曲线
    称量13.2mg芦丁,用无水乙醇定容到25mL容量瓶作为标准溶液。
    表2-1 试剂添加顺序及添加量
    试剂    加入量/mL    
    芦丁标准溶液    0    0.4    0.8    1.2    1.6    2.0    于10mL容量瓶
    无水乙醇    2.0    1.6    1.2    0.8    0.4    0    
    5%亚硝酸钠    0.5    放置6min
    10%硝酸铝    0.5    放置6min
    4%氢氧化钠    4.0    
    加无水乙醇定容,摇匀后放置15min
    在510nm处(扫描找到最大吸收)测定吸光度。用无水乙醇作为参比溶液,用芦丁含量的浓度作为横坐标,纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度,作标准曲线。
    (2) 样品测定
    用研钵把发芽的样品磨成匀浆,称取一定量种芽,加入60mL无水乙醇放于100mL圆底烧瓶内,置于水浴锅上,85℃条件下回流提取60min。过滤,无水乙醇定容于100mL容量瓶。吸取样品量1.0mL,放入10mL容量瓶内(写明标记),用无水乙醇加到2.0mL;加入5%亚硝酸钠溶液0.5mL摇匀,放置6min;加入10%硝酸铝溶液0.5mL,放置6min后;加入4%氢氧化钠溶液4.0mL,摇匀后,加无水乙醇定容,放置15min;在510nm处测定吸光度,用无水乙醇作为参比溶液。
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