(3)加压溶剂萃取法
加压溶剂萃取法是一种利用高温高压加速有效成分提取的全新技术,并已经被广泛的应用在药品,环境和食品领域。此方法是用高压和高温这两个方面作用来提高提取效率的,通过温度的提高来破坏基质同待测的物质之间的交互的作用,如氢键、偶极矩及其范德华力等,同时高压氮气还能使用来做提取剂的物质在高温下仍保持为液态,进一步使被提取的物质与溶剂之间能更好的接触,从而达到高提取的效率。国内外已经有相关报道来使用此方法来提取花色苷,使用此法提取的效果明显高于传统的溶剂提取法、索氏提取和超声波提取法等,并且此法方便省时,提取效率高。此法是以高纯氮气为保护气,防止花色苷的氧化和变性,通过升高温度和压力,增加溶剂对原料颗粒的穿透力,从而加速溶剂的扩散,提高溶出速度和浸出率。同时,在一定的压力下能使提取剂在处于高的沸点的状态之下却仍保持为液态,保持在提取的过程中溶质能被溶剂充分的浸润。刘赋[13]等【29】使用加压溶剂法来提取黄酮类化合物,提取条件为80%的甲醇溶液,温度为120℃,时间为5min,置换体积为15mL。此方法与传统的溶剂提取法相比,它有提取效率高重现性好,提取时间短等优点。
(4)酶提取法
酶法提取天然产物,常用提取花色苷的酶为纤文素酶和果胶酶,其原理是通过酶解纤文素的长链发生断裂从而破坏细胞壁,使吸附在纤文素及细胞壁上的花色苷可以被释放。马玉婷等[4]使用酶解法提取黑果枸杞酒渣中的花色苷,其最佳工艺:酶解的温度为50℃,使0.8%果胶酶的水溶液为浸提剂,酶解提取时间为60 min,料液之比为1:40(g/mL),此条件下,所得的花色苷色价为7.903。
(5)微波辅助提取法
微波是一种非电离的电磁辐射。微波提取法的原理是因为不同的结构物质其在微波场之中的吸收能力强弱的差异,使得基体的物质中的一些区域或某些提取体系中的一些组分被选择性的加热,因而使被提取的物质被分离开,微波辅助提取法具有选择性高、操作时间短、消耗溶剂量少、提取效率高和污染小等特点,可用于对热不稳定的物质的提取。
Cristina等[14]使用微波辅助提取法,提取甜樱桃中的花色苷,提取条件为1000w、45s,此法节能省时,属于环境友好型的方法。李嫒等[15]使用微波辅助提取法从葡萄皮中提取花色苷,其提取花色苷含量是溶剂法提取的四倍。黄琼等[16]使用微波萃取法提取了紫色甘薯的皮中所含有的原花青素,其试验的提取条件是以60%的乙醇作为提取剂的,微波的功率为600W、料液比为l:14(g,mL)、微波的作用时间为140 s、提取了1次,最终得到了原花青素提取率为2.86%。
(6)亚临界水提取法
亚临界水萃取原理是当温度T>374℃,压力P>22.1MPa时水处于亚临界状态时,水的介电常数由常温下£为80下降为5-15,使对非极性和中级性的物质的溶解度增大,从而达到萃取的效果。应用水的无害作用来提取物质,是一种环保、低价的提取方法。近年来有许多研究将其应用在花色苷等天然产物的提取方面。但是并不是所有的花色苷都能在亚临界状态结构不发生变化,所以相对耐热性不强的花色苷不能应用此方法。
(7)其他提取方法
近年来,花色苷在国内外研究较多,还有许多其他的方法来提取花色苷,如高压、反渗透法,超临界流体萃取,微生物发酵,超高压辅助提取和脉冲电场辅助提取都得到了相应的应用[5-6]
以上几种提取方法各有利弊,通常在实验室中一般采用的溶剂提取法较为方便。
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