本论文主要是分离纯化桑黄菌丝体中的小分子活性物质,通过硅胶层析法和高速逆流色谱获得纯度较高的化合物,经实验测定化合物的成分及生物活性,最后得到桑黄菌丝体中能提高人体免疫机能、预防和治疗疾病的有效成分。
1.5 主要研究内容
本课题的研究有三个阶段:一是桑黄菌丝体醇提物不同萃取相的制备与鉴定,桑黄菌丝体经醇提、旋蒸后,依次用不同有机溶剂萃取2次,获得各相萃取物并浓缩保存;菌丝体经不同极性的溶液萃取后达到初步分级,采用颜色反应法来初步判断各萃取相可能含有的物质;二是用HSCCC对上述萃取相进行分离纯化并鉴定化合物成分;三是桑黄菌丝体不同分离组分以及单一化合物的生物活性实验。
主要研究内容如下:
(1) 桑黄菌丝体醇提物不同萃取相的制备:根据极性不同,对桑黄菌丝体醇提物进行初步分离,为之后的分离纯化做准备。
(2) 桑黄菌丝体醇提物不同萃取相鉴定:桑黄菌丝体经不同极性的溶液萃取后达到初步分级,采用颜色反应法,来初步判断个萃取相可能含有的物质,为下一步分离纯化做准备,这更有利于在上高速逆流色谱之前,条件的摸索提供依据和参考。
(3) 桑黄菌丝体乙酸乙酯部分的柱层析分离纯化实验:用硅胶柱层析的方法对乙酸乙酯部分萃取相分离纯化,该过程可得到较纯化合物及组分较少的混合物。
(4) 高速逆流色谱分离纯化实验:优化预试条件,确立最佳的色谱条件,上样,分离纯化,得到纯化化合物,进行结构鉴定。
(5) 桑黄菌丝体不同萃取相抗肿瘤活性测定:对HepG2肝癌细胞作用实验、对K562细胞增殖的抑制作用实验以及抗氧化活性。
(6) 单一化合物抗肿瘤活性活性实验:对HepG2肝癌细胞作用实验(AlamarBlue显色剂)、对K562细胞增殖的抑制作用实验(AlamarBlue显色剂)、体外抑制L1210肿瘤细胞生长实验(AlamarBlue显色剂)、对LNCaP细胞增殖的抑制作用实验、对SW620结肠癌细胞的作用实验、对MCF7乳腺癌细胞的作用实验。
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