- 上一篇：中学生物课在探究学习中学生受挫原因挫原因的调查及相应教学建议
- 下一篇：萝卜S受体蛋白激酶同源建模、评价和通路分析
1.1.4主要仪器
电磁炉，锅，容量瓶，烧杯，锥形瓶，纱布，电子天平，分光光度计，pH计，试管，培养皿，酒精灯，玻璃棒，滴定管，移液管，移液枪，接种环，接种针，离心机，恒温箱，恒温震荡培养箱，超声波破碎仪，灭菌锅，超净工作台，电泳仪等。
1.2 试验方法
1.2.1 酵母活化
(1) 取10支试管分别装入9 mL蒸馏水，加棉塞用报纸包好，放入灭菌锅中随培养基和培养皿灭菌，条件0.105 MPa，121 ℃，20 min。然后放入超净工作台中自然冷却至50～60 ℃。
(2) 称取1 g安琪甜酒曲放入1号试管，震荡，用移液枪吸取1 mL加入2号试管中，依次到10号试管。将冷却好的YPD培养基均匀倒入10个培养皿中，编号1～10，直至冷却凝固。用移液枪吸取试管中的液体10 μL于相对应的培养皿中涂布均匀，放入恒温培养箱中，30 ℃下培养24 h[10]。
1.2.2 酵母菌的初筛
(1) 利用YPD液体培养基进行梯度稀释初选：取10支试管加入9 mL蒸馏水，加棉塞，报纸包装随培养皿和装有YPD培养基的锥形瓶一起灭菌，条件为0.105 MPa，121 ℃，20 min。将灭菌好的材料，仪器拿到超净工作台中操作。
(2) 取长势较好的菌落，用接种环接取一环放入1号试管，震荡，然后用移液枪吸取1 mL放入2号试管，依此到10号试管。再用移液枪吸10 μL于对应的培养皿中，涂布均匀，放入恒温培养箱中，30 ℃培养24 h。
1.2.3 酵母菌的复筛
(1) 培养皿5个一组用报纸包好和装有YPD固体培养基的锥形瓶一块放入灭菌锅中进行灭菌，条件0.105 MPa，121 ℃，20 min。将灭菌好的器材放入超净工作台中。
(2) 待培养基冷却至50～60 ℃时倒平板，直至培养基完全凝固。点燃酒精灯，用接种针挑取长势最好的进行划线，将划线过的培养皿放入恒温培养箱中培养，条件为30 ℃培养24 h。
1.2.4 酵母菌的鉴定
(1) 24 h过后观察划线的酵母，划线培养后酵母能够形成单一菌落，但都成圆状，乳白色，表面光滑湿润不干燥，中央有白色凸起。
(2) 取一载玻片滴入一滴美蓝溶液，再用接种针在菌落最小处挑取少许，放入滴在载玻片的美蓝中，用接种针搅拌均匀，盖上盖玻片，在显微镜下进行观察。
1.2.5酵母菌的扩大培养
(1) 配制500 ml YPD液体培养基，分装到5个100 mL锥形瓶中。
(2) 挑取镜检下菌落接种到锥形瓶中，放入摇床中进行扩大培养，条件为150 r/min，30℃，26 h。
(3) 分别在600 nm下测定培养15 h，17 h，18 h，19 h，24 h，25 h，26 h的酵母菌液的OD值