实验内容:
(1)不同的消毒条件对组织培养的影响
(2)不同的外植体形成愈伤组织的难易
(3)不同激素浓度对形成愈伤组织的影响
(4)诱导茎段生芽
2 材料与方法
2.1实验材料
2.1.1植物材料
本实验的材料是从花卉市场上买回来的盆栽的清香木,见附图1,选取幼嫩的带芽的茎段和叶片作为材料,将带芽茎段经消毒后剪成3cm~5cm的长度,将叶片消毒后剪成约1cm X 1cm大小的有伤口的叶片,作为外植体进行诱导培养。
2.1.2仪器材料
灭菌锅:SANYO Labo Autoclave MLS-3020
水平单向流工作台(SW-CJ-1B,SW-CJ-1C):苏净集团苏州安泰空气技术公司
托盘扭力天平(TN-100B):上海精密科学仪器有限公司
精密电子天平(BS210S,BS4000S):北京赛多利斯天平有限公司
冰箱BCD-188D/208D/218D:青岛海尔电冰箱股份有限公司
Panasonic微波炉
剪刀、镊子、烧杯、量筒、玻璃棒、滴定管、移液枪、培养皿、滴管、pH试纸、封口膜、酒精灯等实验室常用的一些器材和设备。
2.1.3生化试剂与配剂
(1)实验常用生化试剂(均为分析纯):
6-苄胺基嘌呤(6-BA) 中国医药(集团)上海化学试剂公司
吲哚乙酸(IAA) 中国医药(集团)上海化学试剂公司
吲哚丁酸(IBA) 中国医药(集团)上海化学试剂公司
萘乙酸(NAA) 中国医药(集团)上海化学试剂公司
激动素(KT) 中国医药(集团)上海化学试剂公司
环己六醇(肌醇) 上海精化科技研究所
烟酸(VB3) 上海新医学卫生研究所
盐酸硫胺素(VB1) 中国医药(集团)上海化学试剂公司
甘氨酸 上海三浦化工有限公司
盐酸吡哆醇(VB6) 中国医药(集团)上海化学试剂公司
(2)植物激素的配制、储存
萘乙酸(NAA):称取10mg的NAA,将其先溶于少量的95%的乙醇中再用去离子水定容至10mL,倒于瓶中保存在冰箱冷藏处。
2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D):称取10mg的2,4-D将其先溶于少量的1mol NaOH中再用去离子水定容至10mL,倒于瓶中保存在冰箱冷藏处。
6-苄胺基嘌呤(6-BA):称取10mg的6-BA将其先溶于少量的1mol盐酸中再用去离子水定容至10mL,倒于瓶中保存在冰箱冷藏处。
激动素(KT):称取10mg的KT,将其先溶于少量的1mol盐酸中再用去离子水定容至10mL,倒于瓶中保存在冰箱冷藏处。
在称取时,应保证称取量的精确,如果上述激素溶液出现沉淀或是混浊,可以水浴加热使沉淀溶解后使用。
2.2实验方法源:自~751·论`文'网·www.751com.cn/
2.2.1培养基的配制
植物组织培养物的生长分化需要培养基提供它所需要的各种物质及营养。不同种类的植物,不同的培养目的,要求提供的物质不同,因此选择的培养基也就不同。常见的培养基有:MS培养基、white培养基、N6培养基、B5培养基、SH培养基等。本实验采用MS培养基附加不同浓度、不同种类的植物激素、3%的蔗糖、0.8%~0.9%的琼脂(看琼脂的质量,如纯度不公的话,可适当提高琼脂的浓度)。 MS培养基的特点是无机盐(如钾盐、铵盐及硝酸盐)含量均较高,微量元素种类齐全,浓度也较高。