金针菇多糖的生物活性研究(3)

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非酶体系的清除超氧阴离子效率实验，有许多的方法可以检验，本论文则使用鲁米诺-邻苯三酚-CBS(碳酸钠-碳酸氢钠)体系存在的化学发光法。该法操作简单，数据处理方便，已有多项研究采取该法测定多糖的抗氧化活性。该实验要求必须在无光的条件下检测，所以事先要将屋内的灯光关闭，避免因为外在的光源对实验的数据造成干扰。超氧阴离子去除实验的对照以蒸馏水作为对比，设置好平行组。控制好浓度变量。本论文主要运用金针菇的不同多糖展开相关抗氧化，研究乙醇分级醇沉得到的FVP30，FVP60的抗氧化活性。

1.2.3 金针菇多糖的螯合

螯合作用由中间位置的离子和某些满足条件的同一多齿配位体，与多齿配位体多个的配位原子键合，从而形成环态的配合物，该过程称作螯合作用。人体内所摄取的无机铁之中，对于人体来说，所摄取铁元素的之中，实际上被人体吸收的只能达到2-10%而已。因此要将矿物质成为可以被消化的状态，一般需要链接氨基酸，使之形状成为“螯状”的化合物。Chelation在英文中的意思，是将矿物性物质变作可以为人体所消化的形态。一些普遍存在的矿物质产品，例如骨粉，白云石（dolomite）等，都是未做 “螯合”处理过。因此在消化过程中，第一步就是 “螯合”处理。然而大多数人体内是不能轻易地螯合矿物质，将其为人体所吸收。相关的矿物质补品也不能直接利用。因此人体所摄取的物质，许多都是不能完全发挥其功效。食物并不能被大多数人体所有效地消化吸收，各类的含有无机铁的食物之中，真正能被消化的只有2%-10%左右，会有50%会排泄到体外。若是利用螯合，人体对于铁元素的吸收可以增加多倍。金针菇多糖与亚铁离子的螯合能力是探究金针菇活性的一个方面。本论文主要是从金针菇多糖和亚铁离子的结合率大小反映出螯合能力的强弱。首先使金针菇多糖与亚铁离子溶液混合发生螯合反应，研究不同的多糖与亚铁离子的质量比对螯合率产生的影响。在一定的时间后通过检验亚铁离子的变化来表现螯合率大小。

1.2.4 金针菇多糖的免疫活性

金针菇多糖中一些物质有着特殊功效,如蛋白质以及多糖等。这些物质成分，提高了金针菇多糖开发潜力。现今关于金针菇中存在的功能性蛋白的已有研究，其中之一就是具有抗肿瘤、抗艾滋病病毒等功能的核糖体失活蛋白，其能够抑制过敏反应，有利于促进核酸，蛋白质合成、同时加速代谢等上述功能。据现有研究发现金针菇多糖，和其他食用菌多糖类似,能够了抗肿瘤，改善机体的免疫力、以及保肝护肝等。由金针薛培养液中，提取的水溶多糖能显著够抑制小鼠肿瘤S180的活性,同时使肿瘤组织部位坏死增加、糖元含量降低。其和云芝多糖的功能相似,金针菇多糖对肿瘤组织等有着更强的非特异酯酶作用，相比较于云芝多糖强。生物机体的免疫功能，存在着对自己和非己成分的区别以及辨别，免疫系统经过复杂的处理，生命体会对非自身成分(抗原)的做出排斥反应。机体中发挥免疫功能的免疫系统,利用对自己以及非己的识别，应答,从而完成实现三大免疫功能:免疫防御，免疫自稳以及免疫监视。免疫系统能够辨别，清理抗原性异物。在生命体内维持机体内环境平衡。免疫系统执行体液免疫和细胞免疫功能。在本论文中主要通过金针菇多糖对小鼠淋巴细胞的增殖产生的影响，从而探寻其细胞活性。通过对淋巴细胞的增殖，能够改善机体的免疫力，防御外来不利因素的抵抗。

相关免疫学研究中，移植免疫，抗肿瘤免疫和自身免疫性疾病。经常使用近交BALB/C鼠淋巴细胞，进行增殖性和细胞毒性试验。现研究检测淋巴细胞增殖的方式，主要有两种方法，一是标记细胞, 通过直接测量细胞数目来达到实验目的。主要的典型方法包含51铬(Cr)释放法，H-掺入法及荧光标记法。另一类就是以测量细胞代谢的活性作为为基础。同时达到间接计数细胞数的目的。现今已使用范围较广的有MTT法和MTT类似的MTS，WST-1，XTT法以及最新一代的活细胞指示剂Alamarblue法。因为第二种方法具有操作简单，成本低廉和无放射性污染等较多的优点。所以多数的研究都采用第二种方法。本论文的实验则采用Alamarblue法，检测不同浓度的金针菇多糖对小鼠淋巴细胞的增殖。在固定作用时间下测定OD值。