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    6）加入500μl异丙醇，以沉淀RNA，缓慢上下轻柔颠倒几次混匀，然后置于冰上10     min；
    7）4℃，12,000g离心10min，迅速弃掉上清液；
    8）加入1ml的75%乙醇溶液，涡旋片刻，使之与壁分离，然后于4℃，7500g离心5     min，用移液枪小心去除上清液；
    9）可重复步骤7一次；
    10）空气或真空干燥5~10min，加40μl无RNase的水（RNase-free water），用枪头       吸打均匀。-70℃贮存备用。
    11）RNA质量及浓度检测：用0.1%的DEPC水配制0.5×TBE电泳缓冲液，0.8%的琼脂   糖凝胶电泳检测RNA的质量；紫外分光光度计对RNA进行浓度和质量检测，OD     值在1.6~1.8之间为理想值。
    （2）cDNA第一链合成：依据TAKARA TM 反转录试剂盒说明进行cDNA第一链的合      成，操作如下：
    1）首先在无菌的PCR管中依次加入：
    Total RNA    2.0μl   
    5×gDNA Eraser Buffer     2.0μl   
    gDMA Eraser                                                                                                         1.0μl   
    RNase Free dH2O    up to 10 μl   
    Final volume    10 μl   
    2）将上述混合物放置于于PCR仪42℃2min 4℃保存；
    3）然后在第2步PCR管中加入下列反转录反应液（20 μl）：
    5×PrimeScript Buffer 2(for real time)          4.0 μl
    PrimeScript RT Enzyme Mix I
          1.0 μl
    RT Primer Mix                                             1.0 μl
    步骤1的反应液         10.0 μl
    RNase Free dH2O      up to 20 μl
    Final volume          20 μl
    4）将上述混合物于PCR仪中完成逆转录过程：37℃保温15 min，85℃保温5sec，4℃    保存。合成的cDNA置于-20℃贮存备用。
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