- 上一篇：水稻二化螟对氯虫苯甲酰胺和毒死蜱抗药性监测
- 下一篇：长江下游地区养殖水产品中磺胺类抗生素分布特征及人体健康风险评价
仪器设备：高效液相色谱仪为Agilent 1260 和 Agilent G6410B，色谱柱为XDB-C18 (4.6×250 mm, Agilent)。灭菌锅、振荡培养箱、水环氏真空泵、旋转蒸发仪、冷冻干燥机、分析天平。
耗材：Millipore Millex-GP针头滤器 孔径0.22μm、一次性注射器。
1.2 方法
1.2.1 发酵液制备
将保存在-80°C甘油管的SQR9和突变体ΔysnE菌种在LB固体培养基平板划线活化，37 °C培养箱过夜培养直至长出单菌落。分别挑取SQR9和突变体ΔysnE的单菌落接种于3 ml液体LB试管中，37 °C，170 r min-1震荡培养至对数期（OD600=0.6），然后以1%接种量接种于100mL LB液体培养基的锥形瓶中培养至对数期，低速离心菌体并用无菌水洗3次后重悬菌液至OD600=0.5，发酵备用。
解淀粉芽孢杆菌SQR9和突变体ΔysnE分别以1% 接种量分别接种于浓度为0.5 mM的色氨酸（TRP）、吲哚乙醇（TOL）、 吲哚乙腈（IAN）、色胺（TAM）、吲哚丙酮酸（IPA）和吲哚乙酰胺（IAM）的200 ml Landy培养基中，22 °C，100 r min-1避光培养96h，并连续测定生长曲线(其中，色氨酸（TRP）、吲哚乙醇（TOL）、 吲哚乙腈（IAN）、色胺（TAM）、吲哚丙酮酸（IPA）和吲哚乙酰胺（IAM）过孔径0.22μm 为Millipore Millex-GP针头滤器除菌)。
1.2.2 发酵液样品处理
将上述解淀粉芽孢杆菌SQR9和突变体ΔysnE的100 ml发酵液10,000 r min-1，4 °C离心10 min，去除菌体，将上清转移至分液漏斗中，加入等体积的乙酸乙酯剧烈震荡10min，10,000 r min-1，4°C离心10 min，转移乙酸乙酯层于烧瓶中，下层萃取三次，合并乙酸乙酯于烧瓶中。37°C水浴，旋转蒸发有机相近干，用1 ml甲醇溶解，过0.22 μm滤膜，放入-20 °C冰箱保存，供HPLC定量分析。