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    1.1.1 液体培养
       在无菌环境下，将菌种接种至经过高温灭菌的装有LB培养基（pH为7.0）的三角瓶中培养，三角瓶放置于37℃，200rpm的摇床中培养，待菌株生长到对数期即可做相关实验。LB培养基配方见表1。
    表1 LB培养基配方
    Table 1 Components of LB medium
    成分
    Component    1L培养液用量
    Volume/L
    Tryptone    10 g
    Yeast extract    5 g
    NaCl    10 g
    1.1.2 固体培养
    LB固体培养基（琼脂含量为1.5%）可用于菌种的筛选和分离纯化，一般37℃过夜培养。菌种划线培养，可获得单克隆菌株。为鉴定基因敲除菌株，可利用LB/Spc培养基（Spc，壮观霉素）进行筛选。
    1.1.3 脱脂牛奶培养基
    在无菌环境下，将不同胞外蛋白酶缺失的菌种接种至经过高温灭菌（121℃，20min）的脱脂牛奶固体培养基上，培养基放置于37℃，过夜培养。根据菌落周围出现的透明圈大小判断菌种对胞外蛋白的分解能力。一般来说，透明圈半径越大，分解蛋白的能力越强。脱脂牛奶培养基配方见表2。
    表2 脱脂牛奶培养基配方
    Table 1 Components of skim milk medium
    成分
    Component    1L培养液用量
    Volume/L
    脱脂奶粉    15 g
    葡萄糖    10 g
    1.1.4 菌种保藏
    1）配制LB无抗培养基，高压蒸汽灭菌，121℃，20min。
    2）将单菌落接种在加入Spc抗性的培养基中，37℃，220rpm，过夜培养。
    3）取500μL 摇好的菌液，加入500μL 50%甘油。
    4）-80℃冰箱保存。
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