本文以南京农业大学湖熟试验站中不同品种梨为材料,通过对梨树根系中AM真菌的形态学分析研究其侵染情况,并且还研究了不同的土壤理化条件对AM真菌的影响,同时运用分子生物学技术对梨树根系中AM真菌的种类进行研究。该研究将揭示梨园中AM真菌的种质资源,为AM真菌的在我国梨产业中的应用提供研究基础。
1 实验材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 材料
南京农业大学湖熟梨园翠玉、翠冠、丰水、圆黄梨品种根系。
1.1.2 试剂与溶液
试剂:冰醋酸、70 %和95 % 乙醇、10 % KOH、10 % H2O2、0.2 mol/L盐酸、曲利苯蓝(Trpan blue)、乳酸、甘油、苯酚、重铬酸钾(K2Cr2O7)、浓硫酸(化学纯,比重1.54)、FeS04、氢氧化钠、硼酸、甲基红、溴甲酚绿指示剂/碘化钾、蒸馏水、氯化钾溶液、邻啡罗啉指示剂等。
溶液:FAA固定液:500ml(315 ml 70 %乙醇、135 ml水、25 ml甲醛、25 ml冰醋酸);曲利苯蓝-乳酸酚溶液:(100 ml乳酸、100 ml苯酚、100 ml甘油、100 ml蒸馏水、0.2 g曲利苯蓝);乳酸酚溶液:(100 ml乳酸、100 ml苯酚、100 ml甘油、100 ml蒸馏水);邻啡罗啉指示剂:1.485 g分析纯邻啡罗啉,0.695 g化学纯硫酸亚铁(FeS04•7H2O),100 ml蒸馏水,贮于棕色滴瓶中(此指示剂需临用时配制)。
1.1.3主要仪器设备
分光光度计、荧光显微镜、吸水纸、琼脂凝胶电泳仪、PCR仪、恒温水浴锅、研钵、烘箱、超净工作台、分析天平、滴定管、三角瓶、吸管、量筒、小漏斗、角匙、滴定台、试管夹、吸耳球、滴瓶、试剂瓶、连续流动分析仪。
1.2 实验方法
1.2.1 土壤样品采集
于2016年10月采集南京农业大学湖熟试验农场中不同品种的梨根系样品,分别为 ‘翠冠’、‘翠玉’、‘丰水梨’、‘圆黄梨’4个品种。每个品种梨选取2棵梨树,每株按照南北两个方位,去除表层土,剪取带有细根的根系,保存于无菌纸袋中立即带回实验室。一部分根系洗净后置于FAA固定液(315 ml 70 %乙醇、135 ml水、25 ml甲醛、25 ml冰醋酸)中,用于AM真菌侵染率观察;另一部分根系样品保存于-80℃冰箱中,用于根系AM真菌群落结构分析。
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