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1.2.6 细胞质及细胞壁结合POD(POD I和POD II)的提取与活性测定 参照Lee和Lin(1996)[7]及Quiroga等(2000) [8]的方法进行。准确称取l0g左右样品,加入适量磷酸钠缓冲液(50mM,pH6.0,含l0mM NaHSO3和0.1%PVPP )低温研磨,4℃条件12000g离心15min,取上清液。提取后的残渣再用提取缓冲液浸提数次,直至不再检测到POD活性,合并上清液,即为POD I,冷冻干燥浓缩并记录准确体积后进行活性测定。
将提取POD I后的残渣再次浸泡于提取缓冲液中(含1M氯化钠),并于4℃条件下振荡过夜。4℃条件下将材料放入离心机12000g离心15min,取上清液,重复提取步骤三次,合并上清液即为POD II。将POD II冷冻干燥浓缩后装入透析袋,对磷酸钠缓冲液 (50mM, pH6.0)4℃下透析过夜并记录准确体积后进行活性测定。
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