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    摘要：水稻稻瘟病由真菌病原菌Magnaporthe oryzae 引起，是造成世界范围内水稻减产的主要病因。本实验室在抗稻瘟病品种薄稻精细定位到了一个抗性基因Pd-bd1(74.9kb区间)，内包含10个候选基因。本研究通过设计引物对其中的4个候选基因（P1，P2，P3和P4）进行克隆和测序，对薄稻和苏御糯候选基因进行序列比对分析，发现P1，P2，P4在薄稻和苏御糯中核苷酸序列和预测氨基酸序列中存在差异；已测序的部分P3在苏御糯和薄稻中核苷酸序列存在差异，但是预测的氨基酸序列相同。25553
    毕业论文关键词：稻瘟病；Pd-bd1；候选基因；克隆；比对
    Cloning of Rice Blast Resistance Gene Pd-bd1 in Rice Landrace Bodao
    Abstract: Rice blast is caused by the fungal pathogen Magnaporthe oryzae, which is the major cause of decreased yield among the world-wide. A rice blast gene - Pd-bd1, which contained 10 candidate genes, was fine mapped using a blast-resistance rice variety - Bodao. In this study, 4 candidate genes (P1, P2, P3 and P4) were cloned by designing primers respectively. Furthermore, the products of cloning were sequenced and aligned among Bodao and Suyunuo. There were differences in the nucleotide sequence and the predicted amino acid sequence between Bodao and Suyunuo in P1, P2 and P4. In the sequenced part of P3, the nucleotide sequences between Bodao and Suyunuo were different but the predicted amino acid sequences remained the same.
    Key words: Rice blast; Pd-bd1; candidate genes; cloning; alignment
    目录
    摘要    
    关键词    
    Abstract.    
    Key words    
    1. 材料与方法    
    1.1 植物材料    
    1.2 利用CTAB法提取水稻总DNA    
    1.3 引物设计    
    1.4 PCR反应    
    1.5 PCR产物切胶回收    
    1.6 PCR产物测序    
    1.7 序列比对    
    2. 结果分析    
    2.1 P1序列的克隆    
    2.2 P2序列的克隆    
    2.3 P3序列的克隆    
    2.4 P4序列的克隆    
    3. 讨论    
    致谢    
    附录
    水稻地方品种薄稻中抗稻瘟病基因Pd-bd1候选基因在亲本间的序列差异分析
    水稻是最重要的粮食作物，全世界超过50%的人口以水稻为主食( Liu, et al., 2010)。从20世纪751十年代以来，在矮杆品种和杂交稻品种推广的帮助下，水稻的产量已经翻倍。然而，随着栽培种遗传基础的日益狭窄以及各种生物和非生物逆境的出现，水稻种植出现了生产瓶颈，并且又由于病害的出现，导致了30%的产量下降(Skamnioti, et al., 2009)。
    水稻稻瘟病是一个在亚洲和非洲的很多的国家中影响水稻产量和食品安全的主要影响因素。水稻稻瘟病是由子囊真菌引起（Magnaporthe oryzae）水稻重要的病害之一。稻瘟病菌孢子落到稻株上后，萌发成芽管，附着胞附着在表面，然后形成侵入丝直接侵入叶、茎节和穗颈等。在适宜的条件下，侵入后3-4天表现症状，并产生分生孢子用以无性繁殖，在空气潮湿下繁殖速度会加快。水稻以茎节最易感病，此外，穗颈和谷粒都可受害。稻瘟病菌的变异性很大，不同菌株的分生孢子形态和对温度的反应都有一定程度的差异，甚至在致病性上差异也很明显，根据在不同品种水稻上的反应，可以分为许多小种。发病后，病斑上可以不断产生分生孢子引起再次感染。当温湿度适宜时，可以造成病害流行(许志刚, 2009)。在中国，稻瘟病的发病情况很严重。近年来，杂交水稻种植面积不断扩大扩大，但是杂交水稻对于制种亲本是有要求的，这也造成了杂交水稻相对狭窄的遗传背景，再加上中国近年来对氮肥的无节制施用，相应加剧了苗瘟和茎瘟的发生。在东南亚的印度尼西亚、越南和菲律宾等国家稻瘟病发病也日益严重。这些都显示出随着病原菌的进化导致的水稻抗性的减弱和目前育种工作的不足。( Liu, et al., 2010)。
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