试剂:磷酸二氢钠、盐酸、氢氧化钠均为分析纯;鸟嘌呤、胞嘧啶为分析纯,购置于南京奥多福尼生物科技有限公司,胸腺嘧啶为分析纯,购置于美国Sigma有限公司。
2.2 高效液相色谱条件文献综述
色谱柱:C18柱(100 mm×4.6 mm,3.5 μm);流动相:磷酸二氢钠(0.05 mol/L);流速:0.5ml/min;检测波长:248 nm(鸟嘌呤标准品:245 nm,胞嘧啶标准品:274 nm,胸腺嘧啶标准品:248 nm) ;柱温:室温;进样量:10 μL。
2.3 标准曲线的绘制
2.3.1 标准溶液的配制及吸收波长的确定
鸟嘌呤标准液:准确称取鸟嘌呤标准品0.0013 g,用盐酸作为溶剂充分溶解,用磷酸二氢钠定容于250 mL容量瓶中,得浓度为0.0052 g/L的鸟嘌呤标准液。
胞嘧啶标准液:准确称取胞嘧啶标准品0.0011 g,用盐酸作为溶剂充分溶解,用磷酸二氢钠定容于250 mL容量瓶中,得浓度为0.0044 g/L的胞嘧啶标准液。
胸腺嘧啶标准液:准确称取胸腺嘧啶标准品0.0012 g,用盐酸作为溶剂充分溶解,用磷酸二氢钠定容于250 mL容量瓶中,得浓度为0.0048 g/L的胸腺嘧啶标准液。
取鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶三种标准溶液,用紫外/可见分光光度计于190~400 nm波长范围内,以1 nm为单位进行