石墨炉原子吸收分光光度计,可以测定近50种元素。石墨炉法,进样量少,灵敏度高,有的元素也可以分析到pg/mL级。
元素在热解石墨炉中被加热原子化,成为基态原子蒸汽,对空心阴极灯发射的特征辐射进行选择性吸收。在一定浓度范围内,其吸收强度与试液中被测元素的含量成正比。其定量关系可用郎伯-比耳定律:
A= -lg I/I0= -lgT = KCL (1.4.5)
式中I为透射光强度;I0为发射光强度;T为透射比;L为光通过原子化器光程(长度),每台仪器的L值是固定的;C是被测样品浓度;所以A=KC。
利用待测元素的共振辐射,通过其原子蒸汽,测定其吸光度的装置称为原子吸收分光光度计。它有单光束,双光束,双波道,多波道等结构形式。其基本结构包括光源,原子化器,光学系统和检测系统。它主要用于痕量元素杂质的分析,具有灵敏度高及选择性好两大主要优点。广泛应用于各种气体,金属有机化合物,金属醇盐中微量元素的分析。但是测定每种元素均需要相应的空心阴极灯,这对检测工作带来不便。
配置钙标准溶液系列 准确移取2.00、4.00、6.00、8.00、10.0mL钙标准使用掖,分别置于25mL容量瓶中,用去离子水稀释到刻线,摇匀备用。配置试样溶液 准确移取5.00mL于250mL容量瓶中的钙离子溶液于25mL容量瓶中,用水稀释至刻度摇匀备用。 用原子吸收分光光度计测量 通过钙标准工作曲线求得试样中钙。
1.4.4其他方法对钙离子的测定
由于钙离子的灵敏度不高,现在在医学上出来了一种新的方法就是离子选择性玻璃膜电极,他是一种电化学敏感器,敏感膜有玻璃制成,它的电势和溶液中的离子浓度的对数成线性关系。光谱分析技术则利用了化学物质所具有的发射、吸收或散射的光谱学特征,在临床生化检验中得到了极为广泛的应用。Beckman CX7全自动生化仪的离子选择性电极法分别测定钙离子,同时采用Hitachi Modular型全自动生化仪的分光光度法测定上述项目,对离子选择性玻璃膜电极法和分光光度法的测定方法进行评价。[7]
还可以用钙试剂羧酸钠为指示剂络合滴定法测定钙离子。在pH 12~13 条件下,用EDTA 络合滴定钙离子。以钙试剂羧酸钠为指示剂,与钙形成红色螯合物,镁形成氢氧化镁沉淀,不干扰测定。滴定时,游离钙离子首先和EDT A 反应,与指示剂螯合的钙离子随后和EDTA 反应,到达终点时,溶液由红色( 钙微量时溶液为紫蓝色) 转为亮蓝色。[8]
在生物学研究领域,存在着许多分子之间的特异相互作用,例如酶与底物的相互作用、生物膜上受体对作用物的识别、遗传基因的表达等都通过分子之间的相互识别而完成。因此,分子识别研究对生物化学反应体系的研究有重要意义[9-10] 。由分子识别所引起的化学信号必须被转化成中介信号,即可测物理信号才能被测量。电容检测方法是近年来发展起来的一种分析手段。同传统的传感技术相比较,它具有检出限低、灵敏度高、快速简单等优点。目前可以测定的物质包括蛋白质、核酸、磷脂,无机离子等[ 11-14] 。对电容的检测主要采用电桥平衡法[ 15] ,交流阻抗法[ 16] ,电位阶跃法[ 17] 以及循环伏安法等。但是这些方法的共同缺点是响应缓慢,而且除电桥平衡法外,都只能靠推导或模拟而间接得到电容值。
目前,电容传感技术已经被应用于很多领域,如气体电容传感器;基于电容法对组装膜表面酸碱平衡及表面pK a的研究;对重金属离子的检测; 电容免疫传感技术应用到流动注射体系中对免疫球蛋白的检测;对磷脂酶A2在各种自然和人造基底上活性的研究;对肝纤文症标记物的检测等。近几年,用电容手段在非标记的情况下实时在线监测生物分子间的相互识别过程的方法得到了发展。应用这种方法已经成功的研究了缬氨霉素对于钾离子的离子通道行为,并以此为基础研制了钾离子传感器。钙是人体中不可缺少的重要元素,钙离子在环核苷酸的代谢,细胞运动、收缩体系与细胞形状,糖原的代谢,神经递质的合成与释放,细胞分裂,核酸代谢以及胰岛素分泌、胃液分泌、血小板的聚集和释放等生理活动中都起着重要的作用。因此,准确掌握其浓度对于掌握人的身体状态是十分必要的。钙调蛋白是人体内调节钙离子浓度的一种特异性的钙离子结合蛋白,可以和钙离子结合而发生构象变化,并把这种变化传递给其他蛋白,以调节后者的机能,进而参与细胞机能的调节。本实验正是应用钙调蛋白和钙离子的这一特异性的结合来选择性地测量钙离子的浓度。
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