目前应用于检测OPs的色谱方法主要有3种,是薄层色谱法,气相色谱法和高效液相色谱法。
薄层色谱法(TLC)除用特殊的显色剂观察斑点颜色和用比移值定性外,与其他技术联用,不仅可以定性,而且可以对样品中被分离的一种或多种成分进行定量分析。刘安喜等提出了TLC法测定大米等粮食中甲胺磷含量的方法,采用硅胶G板,展开剂为丙酮-氯仿(1:1),显色剂是0 .5 %氯化钯,扫描波长为λ= 363 nm,其最低检出量是0.04 μg ,回收率大概是90 % -110 % 。
气相色谱法(GC)是检测有机磷的国家标准方法,检出限可达到1 ng,具有定性、定量、准确和灵敏度高等特点,并且一次可以测定多种不同成分。杨亚平等采用Class GC-10 色谱工作站、氮磷检测器测定了蔬菜中Ops,其残留量均在0.02-4.00 mg/L,相关系数为0.995 5-0 .9980,检出限大概为1.2 -2.0 μg /L。
高效液相色谱法(HPLC)是以液相色谱柱层析的基础的,引入气相色谱理论并加以修改,从而发展起来的色谱分析方法。
尽管这些技术灵敏准确,但需要对样品进行复杂的预处理,耗时多、成本高,而且所需仪器大多都十分昂贵并且庞大、笨重,分析方法繁琐,需要专业技术人员经常进行文护,不适用于现场检测,所以农药残留快速检测技术是当前生产、销售、监管部门及人民群众所急需的。
1.3.2 快速检测
目前主要是采用乙酰胆碱酯酶分解乙酰胆碱或其他酯类, 而有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶,使其分解失去了活性; 通过检测乙酰胆碱或其他酯类化合物的分解产物, 便可以判断出样品中是否含有有机磷或氨基甲酸酯类农药。但是这种检测方法仅仅能定性反应有机磷和氨基甲酸酯类农药总体残留情况, 既不能准确定量,也不能区分农药种类, 无法明确区分违禁、高毒、中毒还是低毒农药。快速检测的优点有4个:(1)快速,能满足临时需要;(2)方便,可以用于农田、菜场等工作现场;(3)简单,非专业人员简单培训后也可以进行操作;(4)成本低。但唯一的缺点是:无法测定每一种农药的含量,灵敏度较低。
近期发展起来的、基于比色法原理的农药速测卡在一定程度上克服了上述方法的缺点,在市场上得到了一定的推广应用。但是,该类产品存在以下几方面缺陷:一、检测只能定性或半定量,且显色靠目测,主观性大。二、待测样品的色素成分对检测有干扰。三、显色不够稳定,通常随显色反应时间的变化而变化。
生物传感器一般是指由生物敏感部件和转换器紧密配合,特定种类的化学物质或生物活性物质具有选择性和可逆响应的分析装置。相比较其他的分析方法,生物传感技术具有体积小、成本低、敏感度高、选择性以及抗干扰能力强、响应快等许多优点。根据生物敏感元件的不同,生物传感器分为酶传感器、免疫传感器、压电传感器、纳米传感器以及液晶型化学传感器等多种。
(一)酶传感器
本实验主要利用的是酶传感器。酶传感器的基本原理是乙酰胆碱酯酶可以催化乙酰胆碱发生水解反应,如果在 OPs 存在时,它能够抑制胆碱酯酶的活性,且抑制程度由 OPs 的浓度确定。以丁酰胆碱酯酶作为底物的酶生物传感器 ,当酶的摩尔浓度达到2 .5 >10-4 mol/L 时,对硫磷的检出限3.3 μg/L,线性范围表示为3.3-12.0 μg/L,响应时间为<10 min,分析时间大概为 12 min。然而,基于胆碱酯酶的生物传感器大部分属于探(Probe-type),而流动注射型却很少。Lee等报道了流动注射型的胆碱酯酶传感器,这种传感器用 H+电渗析膜将乙酰胆碱酯酶固定在可控制的玻璃泡的一个反应器上,乙酰胆碱酯酶催化乙酰胆碱酯发生水解反应生成胆碱和乙酸,乙酸水解有氢离子。因此,这种电位型乙酰胆碱酯酶的生物传感器能够通过pH的变化进行检测。
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