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    摘要：目前被广泛使用的大多数抗生素都是由土壤微生物产生的，它们将抗生素作为武器彼此竞争生存所需的资源，而这些土壤菌群中必然有携带耐药基因用以保护自身或抵制危害。头孢类抗生素是β-内酰胺类抗生素中极为重要的一种，其对β-内酰胺酶的稳定性比青霉素类高、抗菌谱比青霉素类广、抗菌作用强、过敏反应少、毒性小，被世界临床医学广泛使用。然而，病原菌对它的耐药性却逐年上升，大大影响了其应用。本实验运用宏基因组学功能筛选的方法从土壤微生物中筛选头孢类耐药基因，并对其进行序列分析，旨在为临床医学、农业和畜牧业中细菌耐药性的预测和控制分析提供依据。29488
    毕业论文关键词：宏基因组学功能筛选；头孢类抗生素；耐药基因；序列分析
    Screening of Antimicrobial Resistance Gene of Cephalosporins from Soil Microorganism
    Abstract： Most of the widely used antibiotics are produced by soil microbes, which use antibiotics as a weapon to compete with each other for survival, so these soil flora must carry a drug-resistant gene to protect itself or resist harm.Cephalosporins antibiotics is a extremely important β-lactam antibiotics,whose resistance to β-lactamase better than penicillins, antibacterial spectrum wider than penicillins.It has strong antibacterial effect but less allergic reactions,which is widely used in world clinical medicine.Because of this,Pathogen resistance to it increased year by year，which greatly affected its application。In this study, we used the new metagenomic genomic screening method to screen the cephalosporin-resistant genes from soil microbes and analyze them,in order to provide evidence for the prediction and control of bacterial resistance in clinical medicine, agriculture and animal husbandry.
    Key words: Keywords soil microbes; cephalosporins antibiotics; drug resistance gene screening; sequence analysis
    目  录
    摘要1
    关键词1
    Abstract…1
    Key words1
    引言2
    1材料与方法…2
    1.1研究材料 …2
    1.2实验方法 …3
    1.2.1耐药阳性克隆的筛选…3
    1.2.2耐药亚克隆的构建3
    1.2.3测序、分析及序列进化树的构建…6
    1.2.4最小抑菌浓度测定（MIC）…6
    2结果与分析…7
    2.1耐药阳性克隆的筛选7
    2.2耐药亚克隆的构建…7
    2.3测序、分析及序列进化树的构建9
    2.4最小抑菌浓度测定（MIC）…10
    3总结与讨论…12
    3.1总结12
    3.2讨论…12
    致谢…13
    参考文献14
    土壤微生物来源的头孢类抗生素耐药基因筛选
    引言
    抗生素是20世纪最重要的医学发现之一。自四十年代被广泛使用以来，抗生素对控制人类及动物感染性疾病发挥了巨大的作用，据研究统计抗生素的发现和应用使人类的平均寿命延长了20年以上[1]，然而，随着抗菌药物的不断发展与应用，临床病原菌对常用抗菌药物的耐药性也不断发展。耐药菌的迅速传播严重地威胁着人类身体健康，细菌耐药问题也日益受到人们的重视，成为全球关注的热点[2]。β-内酰胺类抗生素是一类含有典型的β-内酰胺环结构的抗生素，它通过干扰敏感细菌细胞壁黏肽的合成，使细菌细胞壁缺损，菌体失去渗透保护屏障，导致细菌肿胀、变形，在自溶酶激活下，细菌破裂溶解而死亡，主要包括四大类：头孢菌素类、青霉素类、青霉烯类和单环β-内酰胺类抗生素[3]。β-内酰胺类抗生素在临床上已广泛应用了数十年，在抗感染性疾病中发挥了极其重要的作用，然而随着在人医临床、畜牧业中的广泛应用乃至滥用，其耐药菌株相继涌现，已在全球范围内呈现爆发之势，极大地影响了此类抗生素的应用效果[4]。头孢类抗生素是β-内酰胺类抗生素中极为重要的一类，由于其对β-内酰胺酶的稳定性比青霉素类高、抗菌谱比青霉素类广、抗菌作用强、过敏反应少、毒性小[5]的特点，被世界临床医学广泛使用。因此如何快速准确的筛选出头孢类抗生素耐药基因并加以分析已成为如何解决日益增加的细菌抗药性研究的关键所在。
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