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    研究碳水化合物在体内的消化的方法有很多,但通常耗时,对消化产品的分析花费大[6]因而衍生了一系列体外消化的方法并逐步标准化[7]。体外消化模型能模拟人体生理状况,重现性好,一定程度上与体内结果一致,同时还能检测大量样品因而得到广泛应用[8,9]。一般通过测定消化反应后的还原糖含量、糖的组成及糖苷键、分子量、形态变化等研究多糖体外消化的状况[6,10-12]。本论文采用体外唾液、胃液和胃肠液消化模型,对枸杞多糖体外消化的情况进行研究,以为其他多糖的消化提供参考。
    1  材料、试剂及仪器
    1.1  实验材料   
    枸杞样品种类为宁夏1号枸杞。
    1.2  主要试剂
    甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、葡萄糖醛酸、核糖、木糖,美国sigma公司;
    鼠李糖,岩藻糖,阿拉丁试剂公司;
    3,5-二硝基水杨酸,国药集团化学试剂有限公司;
    胃蛋白酶、胃脂肪酶、胰酶,北京索莱宝科技有限公司;
    其余试剂,均为国产分析纯。
    1.3 相关消化液配制
    1.3.1 胃液的配制
    参考Tedeschi等[13]的配制方式对胃液进行配制,并适当做改进。
    配制胃电解质溶液(GES)按以下方法进行:称取0.775gNaCl,0.275gKCl,0.0375gCaCl2,0.15gNaHCO3,加入超纯水并定容于250ml的容量瓶中,用0.1M的HCl将GES的PH调至3。
    配制胃液按以下方法进行:称取37.5mg胃脂肪酶,35.4mg胃蛋白酶加至150g胃电解质中,再加入1.5mlCH3COONa(1M,pH=5)。室温下用磁力搅拌器搅拌10min,再用0.1M的HCl将胃液pH调至3,放置在冰箱中以备用。
    1.3.2 小肠液的配制
    参考Tedeschi等[13]的配制方式对小肠液进行配制,并适当做改进。
    配制肠电解质溶液(SIES)按以下方法进行:称取0.54g NaCl,0.065g KCl,0.033g CaCl2,加入超纯水并定容于100ml的容量瓶中,用0.1M的NaOH将溶液pH调至7。
    配制胰酶溶液按以下方法进行:称取1.4 g胰酶并溶于20g超纯水中,室温下用磁力搅拌器搅拌10 min,然后离心10 min(4800 rpm),收集10 g上清液以备用。
    配制胆汁按以下方法进行:称取4g猪胆粉,加入超纯水并定容于100ml容量瓶中(4%,w/w)。
    真实的小肠环境为十二指肠液环境,为了使实验更为精确地模拟小肠的真实环境,小肠液按以下方法进行配制:向10g SIES中加入20g胆汁,与此同时再加入10 g(7%,w/w)胰酶溶液和1.3mg胰蛋白酶获得前期小肠液(SIENZY),再用0.2M的NaOH将制得的小肠液pH调至7.5。
    1.4  实验仪器与设备
    AY-120/BL-220H型电子天平(日本Shimadzu公司);
    EPED-E2-10TH型实验室级超纯水器(南京易普易达科技发展有限公司);
    HH-6数显恒温水浴锅(江苏国华电器有限公司);
    DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱(上海一恒科技有限公司);
    EYELAN-1100真空旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);
    Telstar*LyoQuest冻干机(西班牙Telstar公司);
    DELTA 320 pH计(梅特勒-托利多仪器有限公司);
    Agilent 1100 高效液相色谱仪(美国Agilent公司);
    LC-20A 高效液相色谱仪(日本岛津);
    TSK-gel G4000 PWXL (7.8×300mm, 10μm)(日本TOSOH公司);
    Eclipse Plus C18(4.6×250mm, 5μm)(美国Agilent公司);
    漩涡混匀器(海门市其林贝尔仪器制造有限公司);
    V-1200型可见分光光度计(上海美普达仪器有限公司)。
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