准确称取上述材料各0.5g装入烧杯中,加无离子水20mL,为使叶片完全浸入水中,可用真空泵抽气20min,于室温下浸泡5小时。然后用电导仪测其每组的电导率(注:再测一组无离子水的电导率)。结果计算:
相对电解质渗透率(%)=(处理浸提液电导率值/对照浸提液电导率值)×100
1.4.3叶绿素含量测定
采用分光光度法测叶绿素含量[15]。具体方法如下:
称取剪碎的各组新鲜样品0.5g,分别放入研钵中,并加少量石英砂和3mL 80%丙酮,迅速研磨成匀浆,未研碎的绿色部分再次加入2mL 80%的丙酮继续研磨,直至残渣不显绿色为止。
取滤纸一张。置于漏斗中,用80%丙酮润湿,沿玻璃棒把提取液倒入漏斗过滤到25mL的容量瓶中,用少量的80%丙酮冲洗研钵,研棒及残渣数次,洗液倒入漏斗,用滴管吸取80%丙酮,将滤纸上的叶绿素全部洗入容量瓶中,直至滤纸和残渣无绿色为止,最后用无水乙醇定容到25mL。
把叶绿素提取液摇匀后倒入比色杯中,以80%丙酮为对照,测652nm处的吸光值(OD)。计算结果:
叶绿素总量(mg/g)=(D652/34.5)×(V/W)×1000
式中V为提取液体积(L)
W为材料鲜重(g)
1.4.4可溶性蛋白含量测定
采用考马斯亮蓝G-250染色法[16]。具体方法如下:
取6支试管,按表1配置0~100ug/mL牛血清蛋白标准液各5mL.准确吸取所配的各管溶液0.1mL,分别放入10mL具塞试管中,加入5mL考马斯亮蓝G-250试剂,盖塞,反转混合数次,放置2min后,测在595nm处的吸光值。以蛋白质标准液浓度为横坐标,以吸光度值为纵坐标,绘制标准曲线。
表 1配置0~100ug/mL血清蛋白液
试剂 管号
1 2 3 4 5 6
1000ug/mL牛血清蛋白量/mL 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
蒸馏水量/ml 5.0 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5
蛋白质含量/ug 0.0 20.0 40.0 60.0 80.0 100.0
称取大豆幼苗0.5g,置于预冷的研钵中剪碎,加入5mL预冷的0.1mol/L (PH7.0)的磷酸缓冲液(分几次加入)。石英砂少许,在冰浴下研磨成匀浆,4000r/min离心10min(2~4℃),所得上清液即为样品提取液。吸取样品提取液0.1mL,按上述方法与考马斯亮蓝G-250试剂反应,测得溶液在595nm处的吸光值,根据标准曲线查出相应的蛋白质浓度。结果计算:
样品蛋白质含量(mg/g FW)=(C×V)/(W×1000)
式中C为查标准曲线所得样品测定管中蛋白质浓度(ug/mL)
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