ErbB信号通路的细胞内分子抑制工具开发和验证(2)

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2.1扩增的dnEGFR cDNA序列的正确性 14

2.2 dnEGFR在体外对ErbB信号的影响 17

2.3 dnEGFR在体内对ErbB信号的影响 17

3.讨论 18

3.1研究意义 18

3.2展望未来 19

参考文献 19

致谢 20

引言

ErbB分子是一类跨膜受体酪氨酸激酶，作用于表皮生长因子（Epidermal Growth Factor，简称EGF）及其配体。ErbB家族包括四个成员，分别是ErbB1（EGFR，HER1），ErbB2（HER2，Neu），ErbB3（HER3）和ErbB4（HER4）[1]。ErbB分子起源于外胚层和中胚层组织，它们分布在很多类型的细胞和器官中，在不同的细胞中有不同的功能，比如促进细胞增殖、生长、转移、粘附等。ErbB家族的四个成员具有相似的分子结构，有一个胞外配体结合域，一个跨膜域和一个胞内的酪氨酸激酶结构域[2]，它们的胞内酪氨酸磷酸激酶结构域具有较高的同源性，主要的不同之处在于胞外的配体结合区。每一个受体的胞外域都包含四个区域（I-IV），其中区域I和III在多肽结合方面起着重要的作用。ErbB家族通过与相应的配体结合形成同源二聚体或者异源二聚体，再继续触发下游的信号通路。ErbB信号连接的下游通路主要包括磷脂酶Cγ（PLCγ）-蛋白激酶C（PKC），促分裂原活化蛋白激酶（MAPK），PI3K/Akt，和JAK激酶2（JAK2）-STAT3通路[1]。其信号传导可以分成三个过程：（1）配体的激活以及受体二聚体的形成；（2）酪氨酸激酶区的活化以及酪氨酸残基的磷酸化；（3）下游级联反应以及信号传导。在ErbB信号连接的几个下游通路中，MAPK信号通路会促进细胞分裂，PI3K/Akt信号通路会促使细胞抗凋亡，促进细胞存活[3]，PLCγ-PKC通路促进细胞迁移和分裂，因此ErbB分子磷酸化之后的最终结果就是促进细胞分裂增殖，抑制细胞凋亡，与肿瘤的发生和发展直接相关。尤其是EGFR和ErbB2在许多上皮细胞瘤中发生突变，在癌症发生与发展中起着重要的作用[4]。而ErbB分子在神经细胞中的作用则是与神经发育有关，如NRG/ErbB信号涉及很多神经发育的过程，包括轴突导向，髓鞘生成，神经突触传递和可塑性等[5]。ErbB家族与帕金森病和精神分裂症等精神疾病也有着密切关系。目前已经在临床上使用的抑制ErbB信号通路的癌症疗法主要以抗体和小分子的酪氨酸激酶抑制剂（TKIs）为主，更多的药物还在研发中。

随着对ErbB分子的研究，对其结构和生物学功能的理解逐渐深入，这已经成为了治疗神经系统疾病和癌症的一个重要靶点。目前临床上应用的抗体和TKIs的作用还十分有限，肿瘤对其具有耐药性，并且虽然TKIs对癌症的治疗有作用，但是其对人体正常的ErbB受体也会产生影响，对人体有一定的毒性，不利于长期使用。如何在不影响ErbB分子的正常功能的情况下抑制其过表达是一个研发药物的重要方向，充分了解ErbB信号通路参与的细胞过程和功能是我们开发具有组织特异性药物的前提。

显性负性策略（dominant negative strategy）是指利用基因工程技术获得特定受体的显性负性突变体（dominant negative mutant），使其高表达，通过高表达突变体的显性负性作用而产生负性调节效应[5]。Meejeon Roh等（2001）利用了缺乏胞内蛋白激酶的突变EGFR（EGFR-tr）的显性负相特性（dominant negative）抑制了EGFR信号[8]，由于ErbB家族的四个分子构象相似[7]，因此我们猜想该突变EGFR也能够抑制其他ErbB分子的信号。源:自'751.·论,文;网·www.751com.cn/