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摘 要： 本文通过高温处理土壤，在其中筛选出一株具有抗真菌作用的菌株，经过16S rDNA测序以及生理生化实验，确认该菌株为地衣芽孢杆菌，命名为BK-001。通过发酵优化实验，确定了该菌株产抗真菌素的培养条件：培养时间48 h左右 ，培养液20%体积，pH8.0，培养液添加2%麦芽糖、0.2%硝酸钾和以及1%吐温- 80。且该菌株的抗菌谱较广，有望将其制成抗真菌药物以此防治病原真菌。55869
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毕业论文关键词：地衣芽孢杆菌；抗真菌活性物质；病原真菌
Abstract：In this paper, through the high temperature treatment, soil was screened with anti fungal strain, after 16S rDNA sequencing and physiological and biochemical experiments, to confirm that the strain of Bacillus licheniformis, which is named BK-001. Through the optimization of fermentation experiment, the substance culture conditions for the production of antifungal strain: culture time 48 h, 20% pH8 culture fluid volume, liquid, adding 2% maltose, 0.2% potassium nitrate and 1% Tween- 80 culture. And the strain of broad spectrum antimicrobial, is expected to be made of antifungal agents to control fungal pathogens.
Key words：Bacillus licheniformis；antifungal peptide；pathogenic fungi
目录
前言4
1材料及方法4
1.1实验材料4
1.2实验方法5
2结果分析.5
2.1芽孢杆菌的分离培养.5
2.1.1生理特征..6
2.216SrDNA测序..6
2.3培养时间对抗真菌活性的影响7
2.4培养液量对抗真菌活性的影响8
2.5pH值对抗真菌活性的影响8
2.6不同碳源对抗真菌活性的影响9
2.7麦芽糖浓度的影响..9
2.8氮源的影响..9
2.9硝酸钾浓度的影响10
2.10Tween-80浓度影响..10
2.11抗菌谱检测.10
结果与讨论.11
参考文献:.12
致谢13
前言 病原真菌，一种没有叶绿素，但有真正的细胞核和细胞壁，繁殖方式是产生各类型的孢子，通常进行营养吸收的生物，会引发多种动植物疾病。我国早年的小麦锈病和稻瘟病曾减产60亿千克的小麦和水稻。植物病原真. 菌引起的植物病害，已经位居植物三大类病害之首[1 ]，水稻病变的240多种病害中，真菌占90%[2 ] 。 真菌引起东植物病害，影响农业、林业和畜牧业的发展，产品质量下降，造成了巨大的经济损失。 为了预防植物真菌病害，过量地使用化学农药，引起了很多问题：（1）环境污染（2）病原真菌耐药性上升；（3）有益微生物淘汰，种群平衡遭到破坏，病原真菌成为优势种群，暴发病害 [3 ]。 利用微生物的抗真菌药物是生物医药的重要部分,具有易分解、效率高、无残留污染且不易产生抗性等优点，逐渐得到社会的关注。 在长期的发.展应用中发现，生物医药.为自然界本身存在的物质，且已形成稳定.地产生和分解规律，会自发进.入自然界的循环。在战略上属于可持续发展，符合生物平衡的要求。因此，发展和应.用生物医药已经成为一种趋势，拥有广.阔的发展前景。 我们从苏州贝克生物科技有限公司厂址土壤中分离到的1 株具有抗真菌作用的菌株。该菌分泌的抗真菌活性物质对各种真菌都有良好抗性，且繁殖能力旺盛，抗逆生长能力强等特点，有望开发成为环保型的生物医药及农药。源'自:751-/论|文'网"]www.751com.cn
1 材料及方法 1. 1 实验材料 1. 1. 1 水稻纹.枯病菌、稻瘟病.菌、节瓜枯.萎病菌、冬瓜枯.萎病菌和苦瓜枯萎病菌为吉.林省延边大学农学院保存，念珠.菌属使用苏州第.五人民医院临.床分离菌株。 1. 1. 2 分离培养培养基使用BHIagar（由青岛海博生物技术有限公司生产）充分溶解于1000 mL蒸馏水，于121℃灭菌后倒入直径9 cm的培养皿中冷却后备用。 真菌培养基 使用PDA 培养基（由青岛海博生物技术有限公司生产）充分溶解于1000 ml蒸馏水，于121℃灭菌后倒入直径9 cm的培养皿中冷却后备用。 发酵培养基 取5 g酵母粉、5 g葡萄糖、8 g牛肉膏、0.5 g K2HPO4、0.5 g NaH2PO4、0.2 g MgSO4·7H2O 、0.2 g CaCl2·2H2O溶于1000 mL 蒸馏水分别装于250 mL三角瓶中,每个三角瓶50 mL ，121℃下灭菌。 1. 2 实验方法 1. 2. 1 分离培养芽孢杆菌属取土壤10 g，溶于100 mL蒸馏水后过滤取液体，在100℃加温10 min后离心（5000 r/min）5分钟，倒掉上清液，取沉渣涂布接种BHIagar平板上，在37℃有氧培养48小时，取发芽芽孢菌落移种BHIagar培养24小时作为菌种。