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2 材料与方法
2.1 试验材料
试验用克氏原螯虾采于江苏省新大运生态农业开发有限公司所属养殖基地（盱眙）。挑选其中体质强壮、附肢齐全、健康活泼、规格一致的个体作为试验虾。克氏原螯虾体长10±1.5cm，体重20±4.0g，试验前24h停止喂食。
试验药品：NH4Cl（分析纯），（产自上海久亿化学试剂有限公司）。
试验设备：实验室水产养殖系统，（每个玻璃缸规格为 80 cm×50 cm×47 cm），SX-620笔试pH测试仪，电子天平。
试验用水：为经充分曝气的自来水，其水质指标如下：温度17±0．5℃，pH 8.10±0.02， NH4＋-N(NH3)、NO2＋-N均未检出[12]。
2.2 方法
2.2.1 预备试验
2.2.1.1 预备试验步骤
对克氏原螯虾暂养2-3 d，暂养之前停止喂食，而后挑选体重体长相近的克氏原螯虾，分为8组，每组10尾。分别放入装入含有30L药液的养殖玻璃缸中。
将NH4Cl配置成母液，按比例稀释至所需浓度，稀释用水为已经过充分曝气，以保证水体有充足的溶氧。设定7个浓度梯度和1个对照组。试验分组及浓度设置详见表1。
水体中非离子氨在总氨中所占的比例与温度和pH值有关，换算公式如下：
f=100/(10Pka-pH+1) 其中Pka=0.09018+2729.92/(273.15+t)温度范围为0～50℃
再由测得的氨氮浓度C0(mg/L)求得非离子氨浓度(mg/L)：
C=1.216×C0×f/100[13] 。
表1 氨氮对克氏原螯虾的急性毒性预备试验分组
对照 1 2 3 4 5 6 7
氨氮浓度/（mg/L） 0 314.31 419.08 523.85 654.82 785.78 916.74 1047.71
非离子氨浓度/（mg/L） 0 14.67 19.56 24.45 30.57 36.68 42.79 48.90
试验采用半静水式水生生物急性毒性试验法，试验期间每24h全部换液1次，保证每个容器中试验期间药液浓度的稳定。试验期间克氏原螯虾禁止喂食，并及时清污。
试验开始后96h作连续观察，每隔3小时观察克氏原螯虾的中毒死亡反应情况，测定水体pH和水温，及时将死虾取出。试验期间，记录克氏原螯虾的死亡个体数量。其死亡个体以细玻璃棒触及腹部5分钟内不产生刺激反应为准。
根据试验结果，设定正式试验浓度范围。
2.2.1.2 预备试验结果
氨氮对克氏原螯虾的急性毒性预备试验96h观察结果详见表2。
表2 氨氮对克氏原螯虾的急性毒性预备试验结果(n=10)
组别 对照 1 2 3 4 5 6 7
24h死亡个数 0 1 1