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体积
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模板 2μL
dNTPs 1μL
10×Taq酶缓冲液 2.5μL
TaqDNA聚合酶 0.4μL
上游引物 1μL
下游引物 1μL
无菌三蒸水 17.1μL
采用2%琼脂糖凝胶对扩增后的全部产物进行电泳检测，将胶上荧光条带小心切下放入干净离心管中并称重，按照相应比例向管内加入溶胶液，待其完全溶解后利用AxyPrepDNA凝胶回收试剂盒进行回收。
样本测序部分由上海凌恩生物完成，最后得到测序数据。
1.2.3序列优化与物种组成分析
根据overlap关系对经高通量测序得到的PE reads进行拼接，再使用软件Trimmomatic和FLASH对序列质量和拼接效果进行质控和过滤，得到最终优化序列并将其与Unite的真菌数据库进行比对，以ITS基因序列相似度97%为依据划分为不同的分类单元（OTU）。使用mothur软件进行OTU聚类分析并构建稀疏曲线，根据数据库中的参考序列对OTU进行种属鉴定和分类学分析。