奶牛CSN1S1基因克隆及其可变剪接体的鉴定与分析(3)

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国内外对CSN1S1基因的研究已长达几十年。1984年，自从Nagao[8]等首次报道了αs1-酪蛋白的cDNA全序列后，Koczan[9]等克隆了牛该基因全序列并进行了一系列研究。2000年，张才俊[10]等通过对青海4种560头牛泌乳中的αs1-酪蛋白进行电泳发现，该基因座由4个等位基因控制。2005年，白文林[11]研究天祝白耗牛的CSN1S1基因序列的遗传多态性，发现呈现单态。2007年，Kusza[12]等通过对不同品种的产奶山羊的CSN1S1基因的研究，发现CSN1S1基因存在种属差异。2009年，Chianese[13]等在地中海水牛的泌乳中发现了αs1-CN（B）。2013年，W.L. Bai[14]等调查研究了牦牛酪蛋白mRNA的相对比例和转化效率，了解到牦牛αs1-酪蛋白（17.5﹪）和k-酪蛋白（20.9﹪）的转录效率不比β-酪蛋白(31.9%)和αs2-酪蛋白(29.7%)高。源!自`751'文"论(文`网[www.751com.cn经定量测定分析，牦牛乳中β-酪蛋白和αs1-酪蛋白是主要的酪蛋白。2015年，M.T. Rodrigues[15]等研究了山羊乳中酪蛋白的概况，与此同时，分析显示CSN1S1基因中的缺陷基因E和F对乳中酪蛋白表达的影响和两者间的区别。

目前，研究比较深入和广泛的是关于蛋白的合成调控途径这一方面，但是对于蛋白质翻译合成相关的基因的研究分析比较少。特别是在奶牛泌乳中高表达的CSN1S1基因。现有的诸多研究多在基因表达这一方面，还需要深入探讨。

中国荷斯坦奶牛是在中国分部最广，数量最多，产乳量最高的奶牛品种，具有一定的研究价值和意义。因此，本课题主要是从中国荷斯坦奶牛乳腺基因组中扩增出CSN1S1基因的编码序列，在基因分子克隆的基础上，进一步研究CSN1S1基因存在的可变剪接情况；然后与NCBI上提供的mRNA参考序列进行比对。一方面可以对NCBI上的参考序列进行鉴别与认证，另一方面也为深入探索乳蛋白基因的表达调控和乳汁的组成成分与合成分泌机制奠定一定的基础。

1 材料与方法

1.1供试材料

泌乳期中国荷斯坦奶牛乳腺组织采自徐州润旺乳业公司。

1.1.1 实验所用试剂

试剂包括：RNAiso Plus（裂解液）、PrimeScript RT kit with gDNA Eraser(perfect Real Time)、Gelview核酸染料、Marker D2000、生工SanPrep柱式PCR产物纯化试剂盒、pMD19-T Vector Kit、Trans1-T1感受态细胞、X-Gal、IPTG（异丙基硫代半乳糖苷）、Amp(氨苄青霉素)、琼脂糖、TBE缓冲液、LB液体培养基、LB-平板、氯仿、异丙醇、无水乙醇、RNase-free水、ddH2O、焦碳酸二乙酯（DEPC）等。