自人类存在以来就追求长生不老,延长生命,而最近有学者称盐酸二甲双胍有延长人类寿命的作用。2013年3月28日,发表在《细胞》(Cell)杂志上的一项研究显示,二甲双胍减慢了衰老过程。2013年7月30日,发表在《自然通讯》(Nature Communications)杂志上的一项研究显示,在小鼠中年时定时给予少量的二甲双胍,有利于小鼠的健康,延长其寿命,然而大剂量的二甲双胍则会减短它们的寿命。2014 年7月7日,发表在《Diabetes,Obesity and Metabolism》 杂志上的一项研究中,英国卡迪夫大学研究人员发现,长期服用二甲双胍可显著延长II型糖尿病患者的寿命,他们有可能比非糖尿病患者活的更久,而该种药物对非糖尿病患者的健康也有益处。2015年7月份,美国纽约科学家准备提出申请,着力研究二甲双胍的是否具有抗衰老的药效。目前盐酸二甲双胍在人类疾病治疗中的主要作用是治疗糖尿病。
之前虽有二甲双胍减缓衰老的相关的文献报道[8],但是其实验对象都是小鼠或犬,没有针对果蝇的相关处理。果蝇具有繁殖、生长、发育、衰老等阶段,与人类很相似,其神经系统结构和人类也很像,这个实验以果蝇作为实验对象,探究不同剂量的盐酸二甲双胍对果蝇寿命及繁殖状况的影响,以期为二甲双胍的延长寿命,减缓衰老的临床效果研究找到科学依据,为深入研究二甲双胍的作用效果及其分子机制奠定基础。现在糖尿病的发病群体日趋年轻化,有越来越多的年轻人在服用盐酸二甲双胍,长期服用盐酸二甲双胍是否对人类的生育能力造成影响,这仍然不清楚。本实验也可以为深入研究二甲双胍对人类生育能力奠定基础。
1 实验材料
1.1 实验材料、试剂和用品
材料:野生果蝇;
试剂:玉米面,盐酸二甲双胍,活性安琪酵母,蔗糖,蒸馏水,琼脂条,少量乙醚;
用品:胶头滴管,玻璃棒,脱脂棉,纱布,锅,电炉,标签纸,广口瓶,锥形瓶,量筒,烧杯,移液管,药匙等。
1.2主要实验仪器
电子万用炉
德国赛多利斯集团电子天平
菲律宾制造电子显微镜
光照培养箱
2实验方法
2.1果蝇培养基的制备
表1 玉米蔗糖培养基
蔗糖 琼脂条 蒸馏水 玉米粉 丙酸 安琪活性酵母
60g 7.5g 1000ml 90g 2ml 15g
制备玉米粉培养基;用量筒量取蒸馏水700ml,倒入容器中加热煮沸后,然后依次加入琼脂条、蔗糖,均匀搅拌至完全溶化。其次用200ml蒸馏水和90g玉米粉充分搅拌配置成溶液,缓慢倒入锅中以防烫伤,再用剩余的蒸馏水洗刷容器内壁附着的玉米粉,此部分溶液也加入到锅中煮沸。等到培养基温度降到50℃左右时,加入称取好的酵母粉加入锅中。加入5ml丙酸充分搅拌即成基础
培养基。
设定培养基中盐酸二甲双胍的浓度:0.01mg/g,0.1mg/g,1mg/g三个浓度,空白对照组中不加入药品。培养基配好后平均分装成12瓶,每瓶70g。称量10mg盐酸二甲双胍,把称量好的盐酸二甲双胍溶解在100ml蒸馏水中,充分摇匀此时溶液的浓度为0.1mg/ml,然后进行浓度梯度稀释,稀释浓度为0.01mg/ml,在1mg/g这组中每瓶加70mg盐酸二甲双胍;在0.1mg/g这组中每瓶滴加7ml浓度为0.1mg/ml盐酸二甲双胍并充分搅拌;在0.01mg/g这组中每瓶滴加7ml浓度为0.01mg/ml盐酸二甲双胍并充分搅拌;冷却至常温,还有一组为空白对照组。含不同浓度的盐酸二甲双胍培养基有三个重复,对照组也是一样。每组贴上相应的标签。