- 上一篇：白藜芦醇分离提取工艺研究
- 下一篇：盐酸二甲双胍对热胁迫下果蝇寿命及生殖能力的影响
在对骨豁硬化(op/op)基因突变小鼠的研究中发现，对于缺少CSF1的小鼠来说，会患有破骨细胞缺陷的骨硬化，通过关节置换手术，对于CSF1缺陷的小鼠来说，其关节滑液中存在高浓度的CSF1，而且巨噬细胞和单核吞噬细胞表面存在CSF1受体，就会产生破骨细胞[7]。
Lee[8]等通过一系列实验表明，在正常小鼠中，体内存在CSF1，颅骨细胞和骨髓细胞放在一起培养之后，可以生成破骨细胞，但是在CSF1缺陷的小鼠中，要想生成一定数量的破骨细胞，需要在培养基中额外加入CSF1。
一系列骨豁硬化(op/op)基因突变小鼠的实验，确定了CSF1在OC（破骨细胞）分化中起着至关重要的作用。op/op基因突变的小鼠可以作为一种模型，代表的是小鼠骨豁硬化症，该疾病是因为该机体骨吸收的作用减弱而造成的[9]。各研究小组都通过研究发现，在op/op基因突变的小鼠中，都是因为突变型CSF1的表达量降低，从而引起破骨细胞缺陷[10-11]。
Yoshida等[12]研究发现，在op/op基因突变小鼠的基因中，发现在CSF1的基因编码区内，有一个突变点，这个突变点导致蛋白质的合成提前终止，不能产生CSF1而造成骨豁硬化。有研究证明，骨豁硬化症可以用重组的CSF1进行治疗，CSF1对于破骨细胞前体的增殖、分化，都起到相当重要的作用[13-16]。
CSF1具有多种生物学功能，因此而受到生物界广泛的重视。临床上也反馈，CSF1在对破骨细胞的调节、肿瘤的治疗都有很重要的意义[17]。
通过这次实验，要证明北京义翘神州生物技术有限公司，生产出的CSF1单克隆抗体，具有良好的生物活性，并且在肿瘤治疗方面能起到积极疗效。
1.实验材料及试剂
1.1实验材料
M-NFS60:为依赖rhMCSF(recombination human MCSF)的小鼠粒白血病细胞株，购自美国ATCC公司。mCSF1抗体(mouse CSF1 Antibody)，mCSF1(mouse CSF1)，CSF1(CSF1)，来自义翘神州生物技术有限公司。
1.2实验仪器
表1实验仪器
名称 生产厂家 型号
东亚牌液氮容器 乐山东亚机电工贸有限公司制造 yDS-100-200C
CO2培养箱 Thermo Fisher Scientific 3112
紫外分光光度计 Thermo ND-2000C
酶标仪 Thermo MK3
倒置显微镜 尼康仪器(上海)有限公司 XDS-2B
生物安全柜 上海瑞仰净化装备有限公司 BBS2A2-1612
混旋器 海门其林贝尔 QL-905
1.3实验试剂
1.3.1 培养基
1640培养基，义翘神州生物技术有限公司提供。
胎牛血清(FBS)，从Gibco公司购买，-20℃保存，使用前灭活，灭活为了除掉血清补体里的敏感物质，减少支原体污染的风险。
M-NFS60培养基(1640+10%FBS+0.05mM β-ME+62ng/mL CSF1)，取10mL的FBS加到90mL的1640培养基，再加入体积100μL 50mMβ-巯基乙醇和62ng/mL 人CSF1。
实验培养基(1640+10%FBS+0.05mM β-ME)，取10mL的FBS加到90mL的1640培养基，再加入体积100μL 50mMβ-巯基乙醇，不加CSF1因子。此实验培养基也作为样品的稀释液。
1.3.2 显色剂
0.4%台盼兰，称0.4g台盼蓝的粉末加入到三角烧瓶中,源Z自+751=文@论(文]网[www.751com.cn,源Z自+751=文@论(文]网[www.751com.cn，搅拌溶解6h以上，待其充分溶解后，用0.20µm滤膜过滤除菌，室温保存即可。