银杏内生真菌会因栖息环境而有选择性的繁衍,也会因树龄及组织上的丰富度不同而选择性存活。研究表明,银杏内生真菌的生命力会因银杏生理状况的改变而改变,随着树龄的增加而抵抗真菌的感染能力越弱。内生真菌分离的种数会因材料的采集、分离时间的不同而有所不同,且其中优势的菌群也有很大的差异,其中以曲霉属、青霉属、交链孢属、刺盘孢属和镰孢菌属比较多。银杏内生真菌能够影响银杏内某些活性物质的质量或产量,甚至能合成并转化与宿主相类似的生物活性物质,科研价值具有良好的前景。
2 实验材料与方法
2.1 材料与设备
2.1.1 菌种来源
2016年2月采自江苏泰兴古银杏森林公园、邳州官湖银杏园、铁富银杏基地、邳州运河师范学院、港上国家银杏博览园、江苏师范大学泉山校区内,分离内生真菌所用的银杏组织均来自树龄从5年到50年不等的无病虫害的健壮的银杏树木。
2.1.2 主要仪器与设备
表1-1 使用仪器名称目录
Table1-1 Equipments used in this study
仪器名称 型号 厂家
自动高温高压灭菌锅 MLS-302C SANYO Electric Co Ltd
双人单面超净灭菌工作台 Bo-Xun 上海博讯医疗设备厂
精密电子天平 BSA2245 北京博医康技术公司
超低温冰箱 HFU586 Basic Thermo Electron LED GmbH
医用冷藏箱 HYC-260 苏州赛恩斯仪器有限公司
美国梯度PCR仪 AB veriti 美国Applied Biosystems (AB)公司
凝胶成像仪 Gel-Doc型 美国伯乐仪器公司
电热恒温培养箱 DNP-9052型 上海精宏实验设备公司
器皿柜 MeiJiaLi HK美加丽实验室装饰(香港)集团公司
微波炉 KD21B-C 美的集团有限公司
电磁炉 IC TW 2104 江苏松桥电器有限公司
2.2 分离培养基的设计
2.2.1 马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA):马铃薯200 g,葡萄糖20 g,琼脂20g,源Z自L751W文·论^文]网[www.751com.cn,蒸馏水1000 mL,PH=7,121℃,20min灭菌[9]。
1.2.2察氏培养基:蔗糖30 g,NaNO3 3 g,KCl 0.5 g,FeS04•7H2O 0.01 g,MgS04•7H2O 0.5 g,KH2PO4 1 g,琼脂20 g,蒸馏水1000 mL,PH=7,121℃,20 min灭菌。
1.2.3马丁培养基:葡萄糖10 g,蛋白胨5 g,KH2PO4 1 g,MgS04•7H2O 0.5 g,琼脂20 g,蒸馏水1000 mL,PH=7,121℃,20 min。
1.2.4 CYM培养基:葡萄糖20 g,蛋白胨2 g,酵母浸膏2 g ,MgS04•7H2O 0.5 g,KH2SO4 0.46 g,K2HS04 1 g,琼脂20 g,蒸馏水1000 mL,PH=7,121℃,20 min灭菌[10]。