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1 材料与方法
1.1 材料
三叶青采自浙江省丽水市庆元县山区野生种, 种植于杭州师范大学塑料大棚中。
1.2 RNA的提取和cDNA第一链的合成
利用生工生物工程(上海)股份有限公司的RNA抽提试剂盒提取三叶青块根中的RNA, 具体操作按照试剂盒说明书进行, 所得RNA溶液用紫外分光光度计定量, 保存-80℃冰箱用于后续实验。利用北京全式金生物技术有限公司的TransScript First-Strand cDNA Synthesis Super Mix试剂盒进行三叶青cDNA的合成。参照Clontech公司SMART RACE cDNA Synthesis Kit的操作步骤合成RACE扩增所用的cDNA。
1.3 引物的设计和合成
利用Primer premier 5.0软件设计相关引物(表1), 引物由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。