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摘要：当前，药用植物大戟资源匮乏。仅在少数地区仍有生长。因此，相关学者、科研人员都开始对此方面不断探索，把解决资源匮乏问题作为药用植物资源的开发利用方向的重中之重。现在，对于药用植物大戟的相关研究已取得了一定进展，国内外学者经过研究，了解了大戟萜类物质的有关代谢途径,并采取相应技术提升其产量，使大戟药源短缺问题得到解决。本研究选取大戟的茎和叶子诱导愈伤组织，根据前期研究发现茉莉酸甲酯可提高药用植物大戟悬浮细胞中的三萜类化合物含量，利用茉莉酸甲酯诱导大戟悬浮细胞，测试了各诱导时间段的大戟细胞中的总三萜含量，并选取三萜类生物合成途径中的相关酶基因进行实时荧光定量PCR, 获得各基因表达对茉莉酸甲酯的响应情况。结果表明，茉莉酸甲酯诱导后的大戟愈伤组织总三萜含量确有提高，相关酶基因表达量也有明显提升。本研究可为后续利用生物工程技术提高药用植物大戟中三萜类含量提供理论依据。51210
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毕业论文 关键词：大戟，茉莉酸甲酯，悬浮细胞，总三萜
Study of molecular mechanism of methyl jasmonate induced triterpenoids metabolism in suspension cell culture of Euphorbia pekinensis
Abstract: At present, the resources of medicinal plant Euphorbia pekinensis are lack. There is only a few grown in a few areas. Therefore, researchers began to do some exploration to solve this problem and development and utilization of medicinal plant resources has also become most important direction. Now, the research of medicinal plant Euphorbia has made some progress,Through the study of Euphorbia pekinensis terpenoid metabolism pathway, and used genetic engineering technology to improve the yield, the Euphorbiaceae medicinal resource shortage problems can be solved. This study chooses Euphorbia pekinensis callus, according to preliminary study that methyl jasmonate can improve the content of triterpenoid compounds in medicinal plant Euphorbia pekinensis cell suspensions. This study used methyl jasmonate to induce suspension cells and test the total triterpenoid content in the induction period of Euphorbia pekinensis cell, and selected triterpene biosynthesis pathway related enzyme genes to do real-time fluorescence quantitative PCR. These genes expression responsed to methyl jasmonate. Results show that methyl jasmonate induced after Euphorbia callus total triterpenoid content is indeed to improve the related gene expression have improved significantly.This study can be for the subsequent use of biological engineering technology and provide a theoretical basis to improve the triterpenoid content in medicinal plant Euphorbia pekinensis.
Keywords: Euphorbia pekinensis, methyl jasmonate, suspension cells, total triterpenoids
目录
1.前言 . 1
2 材料与方法 . 2
2.1 材料 . 2
2.2 试剂与仪器 . 2
2.3 方法 . 3
2.3.1 大戟愈伤组织的诱导 . 3
2.3.2 茉莉酸甲酯诱导实验 . 4
2.3.3 样品总三萜的测定 . 4
2.3.4 各样品总 RNA提取 . 4
2.3.5 三萜合成途径中各基因表达量测定 . 6
3 结果与分析 . 6
3.1 总RNA的提取及检测 . 6
3.2 茉莉酸甲酯诱导下各基因的表达 . 7
3.3 诱导后大戟愈伤组织总三萜含量的变化 10
4. 讨论 . 10
5. 致谢 . 11
参考文献 11
1.前言： 大戟是大戟科多年生草本植物,又名牛奶浆草、山猫儿眼草，是一种药用植物。主要生长于江苏地区,在四川、湖南等地亦产[1]。«神农本草经»将其列为药草,有毒性，苦[2]。具有泄水逐饮、消肿散结等功效[3]。现代研究表明药用植物大戟包含二萜类、三萜类、生物碱、黄酮类等成分。目前，国内外学者对大戟的化学成分及其抗癌活性的研究不断增加，研究范围也在扩展，在生药学、化学成分、药理作用、炮制等方面也都取得了一定成就[4]。近几年，国内外学者发现，大戟具有泻下作用、镇痛抗炎作用、利尿效应、毒性作用等。大戟的一些相关提取物对动物的肾有强烈的刺激性，如果过量使用会导致咽喉肿胀、充血等症状，进而影响中枢神经系统，引起眩晕，昏迷、痉挛，终因虚脱而麻痹死亡。此外，大戟临床作用的研究同样取得很大的进展：作为药物，大戟在临床研究上，主要治疗结核性胸膜炎、肾炎水肿、百日咳等病症，除此之外，大戟还可以作为一种注射液，对于抗肿瘤作用也能起到很好的疗效[5]。外国学者研究发现狼毒大戟的水和醇提取物对动物的肺癌、肝癌细胞的生长有很强抑制效果。源`自*751~文·论^文`网[www.751com.cn对白血病细胞亦能有很好疗效[6]。孙立立等人以用醋量和醋水的比例，煮制火候等作为考察因素，进行实验优选了大戟炮制工艺[7]。南京精神病防治院经多年研究试用中草药,反复筛选,发现大戟对治疗精神病也有很好疗效。邓彬等为了寻找活性较好的二萜类成分，对月腺大戟化学成分进行了相关研究，发现了 7个二萜类化合物[8]。张雷红等人从宽叶大戟中提取到了黄酮类化合物[9]。南京中医药大学通过硅胶柱色谱、制备薄层色谱等手段获得了大戟的化学成分。这些发现对大戟的更进一步研究提供了便利。 当前，对药用植物萜类化合物的研究是植物研究的一个热点。科学研究发现，萜类化合物在抗肿瘤、抗病毒、