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摘要: 噬菌体展示技术是近年来筛选抗体的一种通用方法。它是将外源基因片段表达融合在噬菌体表面，形成噬菌体展示库；然后通过与特定的靶点反应，洗脱不能结合的噬菌体，再将能特异结合的噬菌体侵染大肠杆菌，扩增培养，最后得以高效率筛选。本实验通过利用噬菌体展示技术、PCR扩增技术、酶联免疫吸附法等对噬菌体文库进行了淘洗筛选和库检；然后运用酶切技术对EBOV PCR后的阳性抗体的多样性进行了分析，最后对得到的抗体进行了检测。通过运用噬菌体展示技术成功筛选到6株好的埃博拉抗体。这些抗体为抗体药物和试剂盒的研发奠定了基础，为有效治疗埃博拉疫情提供了强有力的支持。43000
毕业论文关键词: 噬菌体展示技术；EBOV；ELISA；PCR
Application of Phage Display Technology in Screening
of Ebola Antibody
Abstract: Phage display technology is a general method for screening antibodies in recent years，which is the expression of exogenous gene fragment in the surface of the phage to form a phage display library, Then, the phage which not reacting with a specific target can be eluted. In this study phage library was screened and detected by methods of phage display technology、ELISA, Then the enzyme digestion technique was used to analyze the persity of the positive antibody after PCR EBOV, and finally the obtained antibody was detected. Then the phage was specific combined with E.coli, amplification culture, and finally to high efficient screening. At last, six Ebola antibodies were obtained through the phage display technology successfully. These antibodies lay the foundation for the research and development of antibody drugs and kits, and provide strong support for the effective treatment of Ebola in the future.
Key words: Phage display technology; EBOV; ELISA; PCR
目 录
摘要 1
引言 2
1. 实验材料、仪器及试剂 2
1.1实验材料 2
1.2仪器及试剂 3
1.2.1.实验仪器 3
1.2.2.实验试剂 3
2. 实验方法 3
2.1 EBOV噬菌体库的淘洗 3
2.2 EBOV噬菌体淘洗库的ELISA检测 4
2.3 EBOV噬菌体淘洗库一次表达 4
2.4 EBOV噬菌体淘洗库的PCR和酶切分析 5
2.5 EBOV噬菌体淘洗库二次表达 6
3. 实验结果与分析 7
3.1 EBOV噬菌体库的淘洗结果 7
3.2 EBOV噬菌体淘洗库一次表达及检测结果 8
3.3 EBOV噬菌体淘洗库PCR 酶切分析结果 9
3.4 EBOV噬菌体淘洗库二次表达及检测结果 9
4. 讨论与结论 10
参考文献 12
致谢 13
噬菌体展示技术在埃博拉抗体筛选中的应用
引言
噬菌体展示技术（phage display technology）是一种高效率的抗体筛选技术，它是将外源核酸片段与噬菌体的衣壳蛋白融合表达在噬菌体表面，所有融合型的噬菌体就会形成噬菌体展示库[1]。被展示抗体的相对独立的空间结构能够被很好的维持。它常采用丝状噬菌体,在丝状噬菌体表面展示外源核算片段的载体有两种不同类型 [2]，其中pHEN1，pComb3，pComb8等载体有更方便的连接与转化方法，并可以建立大分子文库，在引入特征性功能方面具有相对简单的基因操作方案。再利用具有高特异性和高敏感性的酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked imunosor- bent assay,简称ELISA）[3]对该技术淘选后的结果进行检测。该技术在过去的几十年里发展迅速，已经在抗原表位筛选[2]、疫苗的研制、药物靶点的筛选等应用领域发挥了很大的作用。它结合体外筛选能够对蛋白质结构及功能高效率的识别和优化，从而提供了高通量的筛选系统[4]。另外，其在构建噬菌体抗体文库的应用方面也使得该技术进入了崭新的时代[5]。噬菌体抗体库(phage display antibody library techniques)是新发展起来的一种抗体筛选技术[6-7]。它采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction ,PCR) 技术从鼠或兔脾细胞中得到抗体可变区重链和轻链基因，通过与接头DNA 拼接后，再与噬菌体衣壳蛋白G3P 等基因5’段重组，再利用噬菌体表面展示技术(phage surface display) 把单链抗体ScFv (single-chain fragment variable)表达在噬菌体表面，实现了与抗原的有效结合。