拟南芥脂磷酸磷酸酶 (LPP1)应答盐害的分子机理(3)

菜单

RNA提取试剂TRizol Invitrogen

LB/YEP培养基 TakaRa

X-Gluc 上海生工

Silwet L-77 上海生工

去磷酸化酶CIAP TakaRa

Reverse transcription kit TakaRa

固体试剂、酚氯仿、TAE等上海生工

1．2 实验方法

1．2．1 提取拟南芥基因组总DNA

剪取拟南芥适量的拟南芥叶片，加入400µl的DNA提取液，研磨均匀。12000rpm离心10min，取300µl上清，加入等体积预冷的酚氯仿，12000rpm离心10min，取上清300µl，再加入等体积异丙醇，混匀，放置于-20℃冰箱冷冻沉淀30min。取出后，12000rpm离心，去上清，加入1ml 70%的乙醇清洗一次，12000rpm，离心去上清，放置于超净工作台自然晾干。根据沉淀量的多少，加入30-50µl的无菌水进行溶解，置于-20℃冰箱中备用。

1．2．2 提取拟南芥总RNA

剪取拟南芥叶片1-2片，置于液氮中冷冻。冷冻过后的叶片加入研钵中研磨成粉末状，转移到RNA EP管中。加入1ml的RNAisoTMplus混匀，室温静置5min，4℃，12000rpm，离心5min；将上清转移到新的RNA EP管中，加入1/5 RNAisoTMplus体积的氯仿，振荡混匀，室温静置5min，4℃，12000rpm，离心15min；将上清转移至新的RNA EP管中，加入等体积的异丙醇，混匀，室温静置10min，4℃，12000rpm，离心10min；去上清，加入1ml 70%的乙醇（DEPC处理）清洗一次，4℃，12000rpm离心5min；去上清，在超净台中吹干，溶于DEPC处理的水中。储存于-80℃备用。