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摘要：植物因其固定不动的特性比动物更易受环境因素的影响[1]。盐害、水分和温度已成为全球作物的三大环境危害因素。水稻中的HKT转运体/离子通道家族在Na+耐受机制中发挥重要作用[2]。前期研究发现一类新的MYB-CC类转录因子（命名为OsMYBc）可以和OsHKT1;1基因启动子区域结合，发挥正调控作用。为进一步完善调控网络，前期研究中利用酵母双杂系统，以MYBc N端肽段为钓饵蛋白筛选到与OsMYBc互作的蛋白：RING型泛素E3连接酶，将其命名为OsMSRFP（Oryza sativa MYBc-Stress-related RING Finger Protein）。在本研究中，我们使用细胞生物学，分子生物学和生物化学方法，证明OsMSRFP和OsMYBc间确实存在相互作用。OsMSRFP可泛素化其底物OsMYBc，互作后增强了OsHKT1;1基因启动子活性，提高植物耐盐性。总体而言，OsMSRFP/OsMYBc复合物通过转录调节途径在植物抵御盐胁迫中起重要作用。41918
毕业论文关键词：HKT；MYBc；泛素E3连接酶；盐胁迫；互相作用
Verification and function of rice salt tolerance gene MYBc and ubiquitin E3 ligase (OsMSRFP) interaction
Abstract：Plants are more susceptible to environmental factors than animals because of their immobility. Salt damage, moisture and temperature have become the three major environmental hazards of the global crop. The HKT transporter / ion channel family plays an important role in the Na+ tolerance mechanism. Previous studies have found that a new class of MYB-CC transcription factors (named OsMYBc) binds to the promoter region of the OsHKT1; 1 gene and plays a positive regulatory role. In order to further improve the regulatory network, the previous study by using the yeast two hybrid system, using MYBc N terminal peptide as bait protein to screen the interaction with the OsMYBc protein: RING type E3 ubiquitin ligase, named OsMSRFP （Oryza sativa MYBc-Stress-related RING Finger Protein）. In this study, we used cell biology, molecular biology and biochemical methods to demonstrate that there is interaction between OsMSRFP and OsMYBc. OsMSRFP can ubiquitinate its substrate OsMYBc, after interaction, enhanced OsHKT1; 1 gene promoter activity, improve plant salt tolerance. In general, the OsMSRFP / OsMYBc complex plays an important role in controlling salt stress through transgenic pathways.
Key words: HKT；MYBc；Ubiquitin E3 ligase；Salt stress；interaction
目 录
摘要1
关键词1
Abstract…1
Key words1
引言…1
1材料与方法…2
1.1实验材料 …2
1.1.1植物材料 …3
1.1.2菌株、载体3
1.1.3主要试剂和试剂盒 3
1.2研究方法…3
1.2.1烟草瞬时表达方法3
1.2.2 GUS活性测定…3
1.2.3质粒提取方法…3
1.2.4 GST标签蛋白原核表达及纯化3
1.2.5免疫印迹（western blot）检测3
1.2.6点突变实验3
1.2.7双分子荧光互补BiFC…3
1.2.8 GST Pull Down…4
1.2.9 95体外泛素化试验4
1.2.10数据分析…4
2结果与分析…4
2.1OsMSRFP泛素E3连接酶活性验证…4
2.2OsMSRFP定位于细胞边缘和细胞核4
2.3GST Pull Down证实OsMSRFP是OsMYBc的互作蛋白…5
2.4体内OsMYBc和OsMSRFP存在相互关联…6
2.5OsMYBc是OsMSRFP的反应底物…7
2.6OsMSRFP和OsMYBc互作后对OsHKT1;1起正调控作用8
3结论与讨论9
3.1OsMYBc与OsMSRFP互作且正向调控OsHKT1;1转录…9
3.2蛋白质泛素化结果讨论…9
致谢…10
参考文献10
水稻耐盐基因MYBc与泛素E3连接酶（OsMSRFP）互作验证及功能的初步研究引言
植物因其固定不动的特性比动物更易受环境因素的影响[1]。盐害、水分和温度已成为全球作物的三大环境危害因素。土壤盐渍化是世界范围内面临的环境问题，全世界约8千万公顷的土地遭受盐渍化的侵蚀，中国盐渍土分布广、类型多，总面积约1亿hm2是制约农业生产的重要因素。