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1.3.3苦参提取液对孢子萌发抑制率的测定
采用悬滴法测定苦参提取液对孢子萌发的抑制率[10]:把培养备用的纯化条锈病孢子挑在在PDA培养基上培养7 d,扫落于无菌水中,取水下孢子制成孢子悬浮液(用移液管吸一滴孢子悬液滴于载玻片上[12],盖上盖玻片后在高倍显微镜下镜检,当观察的视野内出现数个孢子后,此时的浓度就为合适浓度),采用血球计数法将孢子浓度调至1012/mL、108/mL、104/mL、和102/mL个孢子,以水为对照组,反复调整观察,重复三个试验组。取6个载玻片,在各凹面处先滴入1滴不同浓度的制备好的苦参浸提液,再加入制备好的孢子悬浮液5滴,在清水对照物组中加入等量的无菌蒸馏水溶液,待混匀后慢慢盖上盖玻片,在操作中避免产生气泡[4]。将处理好的6组载玻片置于培养皿中,在放入前,先在培养皿底部铺一层用无菌水浸湿的无菌滤纸,然后置于250℃恒温培养箱中培养10-15h后在显微镜下观察孢子的萌发情况[13]。最后观察并计数。反复试验三次,计算平均值。按下式计算抑制孢子萌发百分率[3]:
抑菌率(%)=(对照萌发率-处理萌发率)/对照萌发率×100
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