1.2 日粮及饲养管理,
试验在江苏省淮安市淮阴种猪场内,在同栋猪舍、相同饲养条件下进行。试验苏淮猪每日饲喂2次,时间分别为上午8:30-9:30和下午14:30-15:30。试验过程采用干料喂养,饲喂时间段自由采食,全天自由饮水,日常管理与防疫按照淮阴种猪场内生产常规执行。
1.3样品采集
饲养实验结束后,空腹四小时全部屠宰。禁食12小时,自由饮水。宰杀时实行宰前电击晕法,然后采用颈部大血管放血法。采集结肠和盲肠内容物消化率样品,用10%稀硫酸进行混合处理后,保存于-20℃待用。采集结肠和盲肠内容物,于灭菌离心管中,保存于-80℃待用。
1.4样品筛选
进行纤文表观消化率测定。根据NDF表观消化率数据,分别选择7月龄和8月龄NDF消化率最高和最低的5头猪,对结肠和盲肠内容物分解纤文的菌落进行测定。
1.5主要试验仪器
高压灭菌消毒锅:上海申安医疗器械厂;恒温水浴锅:北京医疗设备厂;ANKOM A200i半自动纤文分析仪:梯度PCR扩增仪:美国ABI公司;超净工作台:上海博讯实业有限公司;DYY-III2稳压电泳仪:北京751一仪器厂;凝胶成像仪:美国BIO-RAD伯乐公司;实时荧光定量PCR仪:ABI7300,美国ABI公司;低温高速离心机(Centrifuge 581 OR):美国Thermo公司;可调式微量移液器:美国Thermo公司;紫外分光光度计:美国Thermo公司;千分之一电子天平:德国Sartorius公司;定时恒温磁力搅拌器:上海沪西分析仪器厂。
2 肠道内容物纤文相关消化率测定及纤文分解菌数量测定
2.1 NDF、ADF表观消化率的测定
中性洗涤纤文(NDF):采用GB/T20806-2006介绍的方法测定。其中消煮器为ANKOMA200i半自动纤文分析仪,100℃下处理75min。NDF(%)=100×[1-(饲料中AIA的含量×粪便NDF中的含量)/(粪便中AIA的含量×饲料中NDF的含量)]。
酸性洗涤纤文(ADF):采用NY/T1459-2007介绍的方法进行测定。
2.2 DNA提取
使用粪便微生物基因组 DNA提取试剂盒(天根生化科技有限公司,北京)进行粪便微生物总DNA的提取。将DNA原液稀释至5ng/μl备用。
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