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2.2 DNA提取…5
2.3引物设计5
2.4目的片段PCR扩增条件的摸索…6
2.5细菌标准品的制备…6
2.5.1 PCR扩增…6
2.5.2 利用凝胶电泳技术对扩增结果进行检测6
2.5.3 PCR产物片段纯化…6
2.5.4 Vector载体链接与目的…6
2.5.5 质粒的提取…7
2.5.6 Real-time PCR检测内容物中相关微生物数量…7
3结果与分析…7
3.1NDF消化率分析…7
3.2标准曲线…8
3.3不同纤文消化组的微生物丰度…9
4讨论…9
5小结10
6致谢10
参考文献10
苏淮猪耐粗饲相关肠道微生物特征初步解析
伴随着我国人口数目增长、城镇化比重上升、居民生活水平不断提高，以及农产品的工业及能源用途拓展，近年以来我国粮食消费量呈明显的逐年增长趋势。但是我国耕地面积在不断的减少。而且最近几年人民对于猪肉的需求量逐渐加大，因此需要更多的土地资源和饲料来保障猪肉的供应，进而导致“人猪争粮争地”尴尬局面。因此提高饲料利用率和粗纤文消化率显得尤为重要。
相对于外国猪种,我国地方猪种对粗纤文含量较高的粗饲料利用率高,耐粗饲能力较强，对粗饲料日粮利用和转化率高，增重明显[1]。张斌、胡建新[2]得出豫南黑猪耐粗饲能力较强，对粗饲料日粮利用和转化率高，增重相对明显优于长白和大约克(P<0.05)。秦顺涛，罗荣壮[3]发现陆川猪也有相对于外国猪种具有很强的耐粗饲能力。张秀萍[4]对荷包猪研究中，发现荷包猪能在极低的营养水平下正常生产，可以大量利用青粗饲料和农副产品下脚料，减少蛋白质饲料的给量，节约饲料资源,进而证明荷包猪具有良好的耐粗饲性能。Kemp等对梅山猪与荷兰长白猪饲喂粗纤文日粮，结果发现梅山猪的日粮粗纤文消化率明显高于长白猪[5]。
我国地方品种猪耐粗饲的特性，必然少不了纤文分解菌发挥的作用。猪胃和小肠不能产生降解日粮纤文的酶，消化吸收粗纤文主要通过其大肠中微生物如黄化瘤胃球菌（Ruminococcus flavefaciens）、白化瘤胃球菌（Ruminococcus albus）和产琥珀酸丝状杆菌（Fibrobacter succinogenes）、柔嫩梭菌（Clostridium Leptum）等的降解作用来实现[6]。令人意外的是从猪胃肠道分离出来纤文降解活性最强的是草食梭状芽孢杆菌（Clostridium herbivorans）[7]。在猪粪便微生物中也是主导菌群，在猪胃肠道中数量也很高（107个/g食糜），等同于甚至高于瘤胃纤文降解菌。而与之研究我国地方猪种梅山猪体内也被分离出过这种纤文分解菌。
苏淮猪是新近培育成功的瘦肉型猪种，利用西方生长速度快、瘦肉率高、对精粮依赖度高的大型约克夏与我国淮安地区生长速度慢、肥胖型、耐粗饲的本地品种淮猪杂交选育的新品种，具有25%的淮猪血统。虽然它保留了淮猪耐粗饲特性，但其耐粗饲的具体机制尚不清楚，推测与其大肠纤文分解菌有关。
本试验开展中国地方培育猪种苏淮猪的研究，通过对相同生理阶段的苏淮猪肠道内容物纤文表观消化率的测定，利用荧光定量PCR技术，研究高、低纤文消化率苏淮猪各10头，对其结肠和盲肠内容物内常见纤文分解菌柔嫩梭菌和黄化瘤胃球菌的丰度进行测定，为探究苏淮猪耐粗饲机制提供理论支持，并为培育耐粗饲新猪种提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验设计
选取出生条件相近的苏淮猪育肥猪。在相同饲养环境下进行饲养，保证健康的前提下,在7月龄和8月龄时进行屠宰，采集肠道内容物消化率样品，用10%稀硫酸进行混合处理，测定肠道内容物的NDF表观消化率，采集结肠和盲肠内容物微生物样品，从中分别选取7月龄及8月龄高、低纤文消化率组各5头提取结肠和盲肠内微生物DNA进行Real-time qPCR试验。饲养试验在淮安市淮阴种猪场进行。饲料中均未添加抗生素等。